牛瘤胃宏基因组文库的构建及纤维素酶的筛选
| 内容提要 | 第1-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-21页 |
| ·反刍动物的瘤胃 | 第8-9页 |
| ·瘤胃的结构 | 第8页 |
| ·瘤胃的理化性质 | 第8-9页 |
| ·瘤胃微生物 | 第9-10页 |
| ·瘤胃微生物的多样性 | 第9页 |
| ·瘤胃微生物的研究目的 | 第9-10页 |
| ·宏基因组文库技术 | 第10-11页 |
| ·未培养微生物 | 第10页 |
| ·宏基因组技术起源 | 第10-11页 |
| ·宏基因组文库分类 | 第11页 |
| ·构建宏基因组文库的策略 | 第11-16页 |
| ·基因组DNA的提取与纯化 | 第12-15页 |
| ·宏基因组文库的构建 | 第15页 |
| ·宏基因组文库的筛选 | 第15-16页 |
| ·宏基因组学研究现状、问题和展望 | 第16页 |
| ·纤维素与纤维素酶 | 第16-21页 |
| ·纤维素的结构 | 第16-17页 |
| ·纤维素酶 | 第17-19页 |
| ·纤维素酶研究及实际应用中存在的问题 | 第19-21页 |
| 第二章 实验材料 | 第21-30页 |
| ·牛瘤胃内容物样品 | 第21页 |
| ·菌种与载体 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·抗生素 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21-22页 |
| ·工具酶和Marker | 第22页 |
| ·试剂盒 | 第22页 |
| ·常用仪器 | 第22-23页 |
| ·培养基 | 第23-25页 |
| ·常用溶液 | 第25-30页 |
| 第三章 牛瘤胃内容物宏基因组文库的构建 | 第30-47页 |
| ·实验总流程 | 第30页 |
| ·牛瘤胃内容物DNA的提取和纯化 | 第30-32页 |
| ·牛瘤胃内容物DNA间接提取法 | 第30-31页 |
| ·牛瘤胃内容物DNA的纯化 | 第31-32页 |
| ·牛瘤胃宏基因组文库的评价方法 | 第32-34页 |
| ·16S rDNA引物的选取与PCR扩增 | 第32页 |
| ·PCR产物的纯化与T载体构建 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆的选取和生物信息学分析 | 第33-34页 |
| ·牛瘤胃内容物DNA宏基因组文库的构建 | 第34-39页 |
| ·牛瘤胃内容物DNA酶切时间优化 | 第34-35页 |
| ·牛瘤胃内容物DNA酶切产物的纯化回收 | 第35页 |
| ·载体的制备 | 第35-37页 |
| ·酶切片段与载体连接 | 第37页 |
| ·粘粒的包装、转染 | 第37-39页 |
| ·质粒的电转化 | 第39页 |
| ·实验结果 | 第39-45页 |
| ·牛瘤胃基因组的纯化 | 第39-41页 |
| ·基因组DNA的酶切优化 | 第41-42页 |
| ·文库的构建 | 第42-43页 |
| ·文库的评价 | 第43-45页 |
| ·小结 | 第45-47页 |
| 第四章 β-葡萄糖苷酶的筛选和酶学性质研究 | 第47-60页 |
| ·利用牛瘤胃DNA宏基因组文库进行筛选 | 第47-49页 |
| ·用Whatman 1 号滤纸进行平板影印 | 第47页 |
| ·文库的提取 | 第47-48页 |
| ·粘粒或质粒的转化 | 第48-49页 |
| ·插入片段的分析 | 第49页 |
| ·插入片段的表达 | 第49-52页 |
| ·插入片段重组至表达载体 | 第49-50页 |
| ·重组载体的诱导 | 第50-51页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第51-52页 |
| ·用考马斯亮蓝染色法测定纯化蛋白的浓度 | 第52页 |
| ·酶活力测定 | 第52-53页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第52-53页 |
| ·β-葡萄糖苷酶酶活力的测定 | 第53页 |
| ·实验结果 | 第53-60页 |
| ·筛选结果 | 第53-54页 |
| ·序列分析结果 | 第54-56页 |
| ·蛋白质的克隆，表达和纯化 | 第56-58页 |
| ·酶活力的测定 | 第58-60页 |
| 第五章 讨论 | 第60-62页 |
| ·宏基因组文库的构建 | 第60-61页 |
| ·β-葡萄糖苷酶 Cello-1 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 论文摘要 | 第68-70页 |
| Abstract | 第70-71页 |
