| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-17页 |
| 1.1 木糖代谢概述 | 第11-12页 |
| 1.1.1 开发利用木糖的重要性 | 第11页 |
| 1.1.2 木糖利用的主要外源路径 | 第11-12页 |
| 1.2 提高酿酒酵母工程菌木糖利用的基因工程及代谢工程研究 | 第12-14页 |
| 1.2.1 木糖利用的转运调节 | 第12-13页 |
| 1.2.2 代谢木糖外源途径的引入与调节 | 第13页 |
| 1.2.3 木糖代谢下游磷酸戊糖途径的疏通 | 第13-14页 |
| 1.3 木酮糖激酶研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3.1 木酮糖激酶简介 | 第14-15页 |
| 1.3.2 木酮糖激酶研究现状 | 第15页 |
| 1.4 本课题的主要内容 | 第15-17页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第17-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-22页 |
| 2.1.1 实验用菌株 | 第17页 |
| 2.1.2 实验用质粒及引物 | 第17-19页 |
| 2.1.3 培养基配制 | 第19-20页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 目的片段的PCR扩增及产物回收 | 第22页 |
| 2.2.2 酶切与连接反应 | 第22-23页 |
| 2.2.3 连接产物或质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第23页 |
| 2.2.4 阳性转化子筛选验证及测序 | 第23页 |
| 2.2.5 酵母转化 | 第23-24页 |
| 2.3 酶活测定 | 第24-25页 |
| 2.3.1 粗酶液的制备 | 第24页 |
| 2.3.2 蛋白质含量的测定 | 第24页 |
| 2.3.3 酶活性测定 | 第24-25页 |
| 2.4 产物的HPLC方法检测 | 第25-26页 |
| 第三章 不同源XKS对菌株木糖利用影响研究 | 第26-36页 |
| 3.1 不同源木酮糖激酶基因的人工合成 | 第26-28页 |
| 3.1.1 木酮糖激酶来源的选择 | 第26-27页 |
| 3.1.2 基因的密码子优化及序列拆分 | 第27页 |
| 3.1.3 Overlap PCR基因合成 | 第27-28页 |
| 3.2 木糖利用菌株构建 | 第28-31页 |
| 3.2.1 木糖利用基因单元模块构建 | 第28-29页 |
| 3.2.2 含有不同源木酮糖激酶的单元模块构建 | 第29-30页 |
| 3.2.3 木糖利用初始底盘构建 | 第30页 |
| 3.2.4 不同源木酮糖激酶基因在相同木糖利用菌种中表达 | 第30-31页 |
| 3.3 不同源木酮糖激酶对菌株性能的影响 | 第31-34页 |
| 3.3.1 不同源木酮糖激酶对菌株生长的影响 | 第31-32页 |
| 3.3.2 不同源木酮糖激酶对菌株发酵的影响 | 第32-34页 |
| 3.4 不同源木酮糖激酶酶活测定 | 第34-35页 |
| 3.5 小结 | 第35-36页 |
| 第四章 分子对接辅助木酮糖激酶的理性改造 | 第36-58页 |
| 4.1 分子对接前准备 | 第36-39页 |
| 4.1.1 同源建模模板的选取 | 第36-37页 |
| 4.1.2 蛋白三维结构的建立与优化 | 第37-39页 |
| 4.2 不同源木酮糖激酶与底物的分子对接 | 第39-45页 |
| 4.2.1 木酮糖激酶的催化机理及对接配体的选择 | 第39-40页 |
| 4.2.2 木酮糖激酶与木酮糖的对接 | 第40页 |
| 4.2.3 木酮糖激酶与辅因子的对接 | 第40-44页 |
| 4.2.4 对接结果与酶活关联性分析 | 第44-45页 |
| 4.3 热带念珠菌来源木酮糖激酶理性改造 | 第45-50页 |
| 4.3.1 热带念珠菌木酮糖激酶分子对接结果分析 | 第46页 |
| 4.3.2 第502位赖氨酸的点突变菌株构建 | 第46页 |
| 4.3.3 第502位氨基酸突变对菌株性能影响 | 第46-48页 |
| 4.3.4 突变菌株smh94K502D分子对接验证 | 第48-50页 |
| 4.4 针对保守区氨基酸的改造 | 第50-56页 |
| 4.4.1 保守区氨基酸位点的确定 | 第50-51页 |
| 4.4.2 保守区氨基酸饱和突变文库的构建及筛选 | 第51-52页 |
| 4.4.3 保守区氨基酸突变对菌株性能影响 | 第52-54页 |
| 4.4.4 菌株突变型的确定 | 第54-56页 |
| 4.5 小结 | 第56-58页 |
| 第五章 葡萄糖木糖代谢偶联实现混糖共利用初探 | 第58-66页 |
| 5.1 RPE1在葡萄糖和木糖代谢中的作用 | 第59-60页 |
| 5.2 初始木糖利用菌株的构建 | 第60-61页 |
| 5.3 RPE1基因的敲除 | 第61-63页 |
| 5.4 RPE1敲除菌株葡萄糖木糖共发酵研究 | 第63-65页 |
| 5.5 小结 | 第65-66页 |
| 第六章 结论与展望 | 第66-68页 |
| 6.1 结论 | 第66页 |
| 6.2 展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
