| 硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-22页 |
| 1.1 角蛋白 | 第11-12页 |
| 1.1.1 角蛋白的结构 | 第11-12页 |
| 1.1.2 角蛋白的加工处理 | 第12页 |
| 1.2 微生物产角蛋白酶 | 第12-17页 |
| 1.2.1 角蛋白降解菌 | 第12-13页 |
| 1.2.2 微生物角蛋白酶 | 第13-16页 |
| 1.2.3 微生物角蛋白酶的分离纯化和编码基因 | 第16-17页 |
| 1.3 微生物降解天然角蛋白的机制 | 第17-19页 |
| 1.3.1 机械分解-物理压力理论 | 第17页 |
| 1.3.2 打开二硫键的机制 | 第17-18页 |
| 1.3.3 酶解理论 | 第18-19页 |
| 1.3.4 脂类水解酶 | 第19页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第19-21页 |
| 1.5 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 地衣芽孢杆菌CP-16产胞外蛋白酶的分离和测序 | 第22-35页 |
| 2.1 材料与方法 | 第22-23页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 试剂和仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1 蛋白酶样品的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.2 阴离子交换层析(Q-SEPHAROSE FF) | 第24页 |
| 2.2.3 阳离子交换层析(SP-SEPHAROSE FF) | 第24-25页 |
| 2.2.4 分子筛层析(SEPHACRYL-S 200 HR) | 第25页 |
| 2.2.5 蛋白酶的氨基酸序列测定 | 第25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-33页 |
| 2.3.1 CP-16菌胞外蛋白酶粗酶液的制备 | 第25页 |
| 2.3.2 蛋白酶粗酶液的阴离子交换层析和明胶活性染色 | 第25-27页 |
| 2.3.3 预洗脱峰AP1的阳离子交换层析和明胶活性染色 | 第27-28页 |
| 2.3.4 AP4的分子筛层析(SEPHACRYL-S 200 HR)和明胶活性染色 | 第28-30页 |
| 2.3.5 蛋白酶氨基酸序列测定 | 第30-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-34页 |
| 2.5 小结 | 第34-35页 |
| 第三章 地衣芽孢杆菌CP-16胞外蛋白酶的基因克隆与表达 | 第35-46页 |
| 3.1 材料与方法 | 第35-40页 |
| 3.1.1 菌种和质粒载体 | 第35页 |
| 3.1.2 试剂和仪器 | 第35-36页 |
| 3.1.3 引物合成 | 第36页 |
| 3.1.4 地衣芽孢杆菌CP-16产部分蛋白酶基因片段的获得 | 第36-38页 |
| 3.1.5 地衣芽孢杆菌CP-16蛋白酶基因重组表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| 3.1.6 表达载体的转化 | 第39-40页 |
| 3.1.7 蛋白酶基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第40页 |
| 3.2 结果与分析 | 第40-44页 |
| 3.2.1 蛋白酶的基因序列的克隆 | 第40页 |
| 3.2.2 蛋白酶基因序列的测定结果 | 第40-42页 |
| 3.2.3 蛋白酶基因的酶切与连接 | 第42-43页 |
| 3.2.4 蛋白酶基因在大肠杆菌中表达 | 第43-44页 |
| 3.3 讨论 | 第44-45页 |
| 3.4 小结 | 第45-46页 |
| 第四章 CP-16菌重组蛋白酶酶学性质及其角蛋白水解研究 | 第46-59页 |
| 4.1 材料与方法 | 第46-50页 |
| 4.1.1 酶与底物 | 第46页 |
| 4.1.2 试剂及溶液配制方法 | 第46-47页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第47页 |
| 4.1.4 各酶蛋白蛋白浓度的测定 | 第47-48页 |
| 4.1.5 各重组蛋白酶最适酶促反应PH的测定 | 第48页 |
| 4.1.6 各重组蛋白酶最适酶促反应温度测定 | 第48页 |
| 4.1.7 各重组蛋白酶的底物特异性 | 第48页 |
| 4.1.8 羽毛粉脱脂处理对角蛋白酶活测定的影响 | 第48页 |
| 4.1.9 各重组蛋白酶的角蛋白酶活性、二硫键还原酶活性 | 第48-49页 |
| 4.1.10 各重组蛋白酶水解角蛋白相互关系研究 | 第49-50页 |
| 4.2 结果与分析 | 第50-55页 |
| 4.2.1 重组蛋白酶的部分酶学性质 | 第50-51页 |
| 4.2.2 羽毛粉脱脂处理对不同重组蛋白酶角蛋白酶活性测定的影响 | 第51-52页 |
| 4.2.3 CP-16菌发酵产物脂肪酶活性的测定 | 第52页 |
| 4.2.4 不同蛋白酶的角蛋白酶活性和二硫键还原酶活性的测定 | 第52页 |
| 4.2.5 各重组蛋白酶水解羽毛角蛋白的协同作用 | 第52-54页 |
| 4.2.6 不同重组蛋白酶对完整天然羽毛的水解 | 第54-55页 |
| 4.3 讨论 | 第55-58页 |
| 4.4 小结 | 第58-59页 |
| 第五章 全文结论 | 第59-60页 |
| 5.1 主要结论 | 第59页 |
| 5.2 创新点 | 第59页 |
| 5.3 研究展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 附录 | 第68-74页 |
| 1 明胶活性电泳 | 第68-71页 |
| 2 蛋白酶活性的测定(福林-酚法) | 第71页 |
| 3 透析袋预处理 | 第71-72页 |
| 4 大肠杆菌感受态细胞(E.COLI DH5A)的制备 | 第72页 |
| 5 蛋白质含量标准曲线和对硝基苯酚标准曲线 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简介 | 第75页 |
