| 符号说明 | 第5-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 1.引言 | 第15-30页 |
| 1.1 禽波氏杆菌研究现状 | 第15-20页 |
| 1.1.1 病原特性 | 第15页 |
| 1.1.2 致病机理 | 第15-16页 |
| 1.1.3 病理变化 | 第16页 |
| 1.1.4 流行现状 | 第16-17页 |
| 1.1.5 禽波氏杆菌病防治 | 第17页 |
| 1.1.6 致病基因 | 第17-20页 |
| 1.1.6.1 菌毛基因 | 第17-18页 |
| 1.1.6.2 铁利用基因 | 第18-19页 |
| 1.1.6.3 外膜蛋白 | 第19-20页 |
| 1.2 疫苗佐剂研究现状 | 第20-25页 |
| 1.2.1 铝佐剂 | 第20-21页 |
| 1.2.2 油乳佐剂 | 第21页 |
| 1.2.3 微生物来源佐剂 | 第21页 |
| 1.2.4 微粒抗原递送体系 | 第21-22页 |
| 1.2.5 天然来源佐剂 | 第22页 |
| 1.2.6 中药免疫增强剂 | 第22-23页 |
| 1.2.7 多糖佐剂 | 第23-24页 |
| 1.2.8 松花粉多糖的研究进展 | 第24-25页 |
| 1.3 毕赤酵母表达系统 | 第25-30页 |
| 1.3.1 毕赤酵母简介 | 第25-26页 |
| 1.3.2 毕赤酵母的表达方式 | 第26-27页 |
| 1.3.3 外源蛋白的分泌 | 第27页 |
| 1.3.4 常见的表达菌株 | 第27-28页 |
| 1.3.5 表达质粒 | 第28-30页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第30页 |
| 2.材料与方法 | 第30-39页 |
| 2.1 禽波氏杆菌 ompA 的原核表达 | 第30-33页 |
| 2.1.1 菌株 | 第30页 |
| 2.1.2 试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.3 ompA 基因的 PCR 扩增 | 第31页 |
| 2.1.4 ompA 基因的克隆测序 | 第31-32页 |
| 2.1.5 重组表达载体的构建和检测 | 第32页 |
| 2.1.6 重组蛋白的表达 | 第32-33页 |
| 2.1.7 目的蛋白的检测和纯化 | 第33页 |
| 2.2 泰山松花粉多糖对禽波氏杆菌 ompA 原核表达产物在小鼠体内免疫反应的影响 | 第33-36页 |
| 2.2.1 试验材料 | 第33页 |
| 2.2.2 试验仪器 | 第33页 |
| 2.2.3 实验动物 | 第33页 |
| 2.2.4 泰山松花粉多糖的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.5 疫苗制备 | 第34页 |
| 2.2.6 免疫程序 | 第34页 |
| 2.2.7 松花粉多糖对 ompA 在小鼠体内体液免疫的影响-血清抗体效价检测 | 第34页 |
| 2.2.8 松花粉多糖对 ompA 在小鼠体内细胞免疫的影响 | 第34-36页 |
| 2.2.8.1 血清 IL-2 检测 | 第34页 |
| 2.2.8.2 淋巴细胞转化率测定 | 第34-35页 |
| 2.3.8.3 外周血 CD4+,CD8+的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.9 泰山松花粉多糖对禽波氏杆菌 ompA 在小鼠体内粘膜免疫反应的影响-小肠SIgA 检测 | 第36页 |
| 2.2.10 数据分析 | 第36页 |
| 2.3 禽波氏杆菌 ompA 毕赤酵母表达 | 第36-39页 |
| 2.3.1 实验材料 | 第36页 |
| 2.3.1.1 菌株及质粒 | 第36页 |
| 2.3.1.2 实验试剂 | 第36页 |
| 2.3.2 禽波氏杆菌 ompA 基因引物设计及 PCR 扩增 | 第36-37页 |
| 2.3.3 ompA-pPIC9 真核表达载体的构建 | 第37页 |
| 2.3.4 ompA-pPIC9 转化毕赤酵母 | 第37-38页 |
| 2.3.5 毕赤酵母转化阳性子的鉴定 | 第38页 |
| 2.3.6 阳性子的诱导表达与鉴定 | 第38页 |
| 2.3.7 重组蛋白的 SDS-PAGE 分析和 Western 鉴定 | 第38-39页 |
| 3.结果与分析 | 第39-48页 |
| 3.1 禽波氏杆菌 ompA 基因的原核表达 | 第39-41页 |
| 3.1.1 禽波氏杆菌 ompA 基因扩增，克隆与鉴定 | 第39-40页 |
| 3.1.2 禽波氏杆菌 pET32a-ompA 重组表达质粒的构建与鉴定 | 第40页 |
| 3.1.3 重组蛋白的纯化及鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2 泰山松花粉多糖对禽波氏杆菌 ompA 原核表达产物在小鼠体内免疫应答的影响 | 第41-45页 |
| 3.2.1 泰山松花粉多糖对禽波氏杆菌 ompA 原核表达产物在小鼠体内体液免疫反应的影响-血清抗体效价 | 第41-42页 |
| 3.2.2 泰山松花粉多糖对禽波氏杆菌 ompA 原核表达产物在小鼠体内体液免疫反应的影响 | 第42-44页 |
| 3.2.2.1 血清 IL-2 浓度 | 第42页 |
| 3.2.2.2 T 淋巴细胞转化率 | 第42-43页 |
| 3.2.2.3 外周血 CD4+和 CD8+含量 | 第43-44页 |
| 3.2.3 泰山松花粉多糖对禽波氏杆菌 ompA 在小鼠体内粘膜免疫反应的影响-小肠SIgA 含量 | 第44-45页 |
| 3.3 禽波氏杆菌 ompA 基因的毕赤酵母表达 | 第45-48页 |
| 3.3.1 禽波氏杆菌 ompA 基因 PCR 扩增与克隆测序 | 第45页 |
| 3.3.2 表达载体的构建和鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3.3 转化毕赤酵母阳性子筛选 | 第46-47页 |
| 3.3.4 重组蛋白的诱导表达与检测 | 第47-48页 |
| 4.讨论 | 第48-52页 |
| 4.1 禽波氏杆菌 ompA 基因的原核表达 | 第48-49页 |
| 4.2 泰山松花粉多糖对禽波氏杆菌 ompA 在小鼠体内免疫反应的影响 | 第49-50页 |
| 4.3 禽波氏杆菌 ompA 基因毕赤酵母表达 | 第50-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-64页 |
| 个人简介 | 第64-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
