| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略词表 | 第9-13页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| 实验一 殊异韦荣菌苹果酸脱氢酶的基因克隆及检测 | 第16-32页 |
| 1. 实验材料 | 第16-18页 |
| 1.1 菌种与质粒 | 第16页 |
| 1.2 酶及主要试剂 | 第16-17页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第17-18页 |
| 2. 实验方法 | 第18-25页 |
| 2.1 殊异韦荣菌苹果酸脱氢酶基因的 PCR 克隆 | 第18-20页 |
| 2.1.1 殊异韦荣菌基因组 DNA 的提取 | 第18-19页 |
| 2.1.2 引物的设计 | 第19页 |
| 2.1.3 PCR 的扩增 | 第19-20页 |
| 2.2 PCR 克隆产物的回收及鉴定 | 第20-25页 |
| 2.2.1 PCR 产物的回收 | 第20页 |
| 2.2.2 PCR 回收产物和 pET-28a-c(+)载体 EcoRⅠ、SalⅠ双酶切 | 第20-21页 |
| 2.2.3 PCR 回收产物和 pET-28a-c(+)载体的酶切产物用 T4 DNA连接酶连接 | 第21-22页 |
| 2.2.4 CaCl2法制备大肠杆菌 DH5α感受态细胞 | 第22页 |
| 2.2.5 殊异韦荣菌 MDH-pET-28a-c(+)重组质粒的转化 | 第22-23页 |
| 2.2.6 殊异韦荣菌 MDH-pET-28a-c(+)重组质粒提取 | 第23-24页 |
| 2.2.7 殊异韦荣菌 MDH-pET-28a-c(+)重组质粒酶切及 PCR 鉴定 | 第24页 |
| 2.2.8 殊异韦荣菌 MDH-pET-28a-c(+)重组质粒测序 | 第24-25页 |
| 3. 实验结果 | 第25-30页 |
| 3.1 殊异韦荣菌 MDH 基因 PCR 扩增产物琼脂糖凝胶电泳检测 | 第25页 |
| 3.2 殊异韦荣菌 MDH-pET-28a-c(+)重组质粒 PCR 及酶切鉴定 | 第25-26页 |
| 3.3 殊异韦荣菌 MDH-pET-28a-c(+)重组质粒序列测定 | 第26-28页 |
| 附录一 | 第28-30页 |
| 4. 讨论 | 第30-32页 |
| 实验二 殊异韦荣菌苹果酸脱氢酶基因的重组表达，纯化及活性测定 | 第32-44页 |
| 1. 实验材料 | 第32页 |
| 1.1 菌种与质粒 | 第32页 |
| 1.2 主要酶、试剂及实验仪器 | 第32页 |
| 2. 实验方法 | 第32-38页 |
| 2.1 殊异韦荣菌 MDH-pET-28a-c(+)重组质粒的诱导表达 | 第32-38页 |
| 2.1.1 大肠杆菌 BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 2.1.2 殊异韦荣菌 MDH- pET-28a-c(+)重组质粒的转化 | 第32-33页 |
| 2.1.3 诱导表达条件的优化 | 第33页 |
| 2.1.4 表达产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第33-34页 |
| 2.1.5 聚丙烯酰胺凝胶的染色和脱色 | 第34页 |
| 2.1.6 重组蛋白表达方式的确定 | 第34-35页 |
| 2.1.7 MDH- pET-28a-c(+)重组质粒在 BL21(DE3)中的高效表达 | 第35页 |
| 2.1.8 重组蛋白的纯化、鉴定及活性测定 | 第35-38页 |
| 3. 实验结果 | 第38-41页 |
| 3.1 MDH- pET-28a-c(+)重组质粒在 BL21(DE3)中表达的优化 | 第38-40页 |
| 3.1.1 表达的诱导剂浓度的优化 | 第38-39页 |
| 3.1.2 表达时间的优化 | 第39-40页 |
| 3.2 MDH- pET-28a-c(+)重组质粒在 BL21(DE3)中表达形式及性质的确定 | 第40页 |
| 3.3 MDH- pET-28a-c(+)重组蛋白的纯化及活性测定 | 第40-41页 |
| 4. 讨论 | 第41-44页 |
| 4.1 表达菌及表达载体的选择 | 第41-42页 |
| 4.2 表达条件的优化 | 第42-43页 |
| 4.3 重组蛋白表达形式的确定、纯化及活性测定 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 攻读硕士学位期间参与发表的学术论文 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
