| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一部分: 非小细胞肺癌组织中HIF-1α与ETS-1蛋白表达、微血管密度、临床参数以及总生存期之间的关系 | 第14-25页 |
| 1.1 前言 | 第14-15页 |
| 1.2 材料与方法 | 第15-17页 |
| 1.2.1 实验器材 | 第15页 |
| 1.2.2 实验试剂 | 第15-16页 |
| 1.2.3 组织芯片 | 第16页 |
| 1.2.4 免疫组织化学法 | 第16-17页 |
| 1.2.5 统计学方法 | 第17页 |
| 1.3 实验结果 | 第17-22页 |
| 1.3.1 HIF-1α、ETS-1蛋白在肺癌组织中的表达明显高于癌旁组织 | 第17-18页 |
| 1.3.2 肺癌肿瘤组织中ETS-1蛋白含量与HIF-1α蛋白含量相关性分析 | 第18-19页 |
| 1.3.3 肺癌组织中HIF-1α,ETS-1蛋白含量与MVD(微血管密度)的关系 | 第19页 |
| 1.3.4 HIF-1α蛋白表达与肺癌患者肿瘤大小,病理分期呈正相关 | 第19-21页 |
| 1.3.5 HIF-1α蛋白高表达提示肺癌患者总生存期缩短 | 第21-22页 |
| 1.4 讨论 | 第22-24页 |
| 1.5 小结 | 第24-25页 |
| 第二部分: 中长期乏氧环境通过上调HIF-1α诱导肺癌细胞内皮样转变,并介导贝伐单抗耐药 | 第25-51页 |
| 2.1 前言 | 第25-26页 |
| 2.2 材料与方法 | 第26-36页 |
| 2.2.1 实验器材 | 第26-27页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.3 细胞系的常氧与乏氧培养 | 第28页 |
| 2.2.4 细胞系的冻存与复苏 | 第28-29页 |
| 2.2.5 细胞系形态学观察 | 第29页 |
| 2.2.6 Western-blot分析方法 | 第29-30页 |
| 2.2.7 免疫荧光分析方法 | 第30-31页 |
| 2.2.8 细胞摄取实验 | 第31页 |
| 2.2.9 细胞三维成管实验 | 第31页 |
| 2.2.10 Transwell侵袭实验 | 第31-32页 |
| 2.2.11 细胞凋亡实验 | 第32页 |
| 2.2.12 CCK-8实验 | 第32页 |
| 2.2.13 动物模型建造 | 第32-33页 |
| 2.2.14 质粒构建 | 第33-34页 |
| 2.2.15 SiRNA-ETS-1构建 | 第34-35页 |
| 2.2.16 质粒以及SiRNA-ETS-1转染 | 第35-36页 |
| 2.2.17 统计方法 | 第36页 |
| 2.3 实验结果 | 第36-48页 |
| 2.3.1 乏氧培养条件下肺癌细胞系形态间质化程度升高 | 第36-37页 |
| 2.3.2 肺癌细胞系乏氧培养三周后内皮标志物明显上调 | 第37-38页 |
| 2.3.3 肺癌细胞系经过三周乏氧培养后内皮样细胞功能出现上调 | 第38-40页 |
| 2.3.4 乏氧培养三周形成的肺癌内皮样细胞对Avastin出现明显耐药 | 第40-42页 |
| 2.3.5 肺癌内皮样细胞可以促进肺癌细胞增殖,而且不能被Avastin有效阻滞 | 第42-43页 |
| 2.3.6 肺癌内皮样细胞可以促进肺癌血管新生,而且不能被Avastin有效阻滞 | 第43-44页 |
| 2.3.7 肺癌内皮样细胞可以促进肺癌转移,而且不能被Avastin有效阻滞 | 第44-45页 |
| 2.3.8 构建质粒上调常氧肺癌细胞系ETS-1蛋白表达 | 第45-47页 |
| 2.3.9 构建SiRNA-ETS-1下调乏氧肺癌细胞系ETS-1蛋白表达 | 第47-48页 |
| 2.4 讨论 | 第48-50页 |
| 2.5 小结 | 第50-51页 |
| 第三部分: HIF-1α/ETS-1正反馈通路诱导乏氧条件下肺癌细胞内皮样改变,并介导贝伐单抗耐药 | 第51-83页 |
| 3.1 前言 | 第51-52页 |
| 3.2 材料与方法 | 第52-61页 |
| 3.2.1 实验器材 | 第52-53页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第53-54页 |
| 3.2.3 Western-blot分析方法 | 第54-55页 |
| 3.2.4 免疫荧光分析方法 | 第55-56页 |
| 3.2.5 EMSA(凝胶迁移实验) | 第56-58页 |
| 3.2.6 ETS-1 ELISA | 第58-59页 |
| 3.2.7 VEGF ELISA | 第59-60页 |
| 3.2.8 质粒以及SiRNA-ETS-1转染 | 第60页 |
| 3.2.9 动物模型建造 | 第60-61页 |
| 3.2.10 统计学方法 | 第61页 |
| 3.3 实验结果 | 第61-80页 |
| 3.3.1 肺癌细胞经过乏氧培养以及HIF-1α抑制剂处理后ETS-1与VEGF含量变化 | 第61-63页 |
| 3.3.2 肺癌细胞系经过乏氧培养以及加入HIF-1α抑制剂后ETS-1启动子含量变化 | 第63-64页 |
| 3.3.3 肺癌细胞系经过乏氧培养以及加入HIF-1α抑制剂后ETS-1蛋白含量变化 | 第64-66页 |
| 3.3.4 肺癌内皮样细胞中ETS-1可调控HIF-1α表达 | 第66-67页 |
| 3.3.5 上调肺癌细胞系ETS-1后肺癌内皮标志物明显上调 | 第67页 |
| 3.3.6 上调肺癌细胞系ETS-1后对于贝伐单抗完全耐药 | 第67-69页 |
| 3.3.7 上调肺癌细胞系ETS-1以及给予贝伐单抗后内皮功能变化 | 第69-71页 |
| 3.3.8 下调肺癌内皮样细胞ETS-1高表达后可以下调肺癌内皮标志物表达 | 第71-72页 |
| 3.3.9 下调肺癌内皮样细胞ETS-1高表达可以下调肺癌内皮功能 | 第72-74页 |
| 3.3.10 下调肺癌内皮样细胞ETS-1表达可以增强贝伐单抗促凋亡的能力 | 第74-75页 |
| 3.3.11 下调ETS-1表达可增强贝伐单抗抑制肿瘤生长 | 第75-77页 |
| 3.3.12 下调ETS-1表达可以增强贝伐单抗抑制血管生成作用 | 第77-78页 |
| 3.3.13 下调ETS-1表达可以增强贝伐单抗抑制肺癌远处转移的能力 | 第78-79页 |
| 3.3.14 下调ETS-1表达可以改善肺癌组织乏氧环境 | 第79-80页 |
| 3.4 讨论 | 第80-82页 |
| 3.5 小结 | 第82-83页 |
| 第四部分: 乏氧环境下ETS-1可以激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进肺癌细胞内皮样改变 | 第83-92页 |
| 4.1 前言 | 第83-84页 |
| 4.2 材料与方法 | 第84-88页 |
| 4.2.1 实验器材 | 第84页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第84-85页 |
| 4.2.3 细胞系的常氧与乏氧培养 | 第85页 |
| 4.2.4 细胞系的冻存与复苏 | 第85-86页 |
| 4.2.5 SiRNA-ETS-1转染 | 第86-87页 |
| 4.2.6 Western-blot分析方法 | 第87-88页 |
| 4.3 实验结果 | 第88-90页 |
| 4.3.1 下调肺癌内皮样细胞ETS-1表达PI3K/AKT/mTOR信号通路表达下调 | 第88-89页 |
| 4.3.2 给予肺癌内皮样细胞PI3K抑制剂处理发现肺癌细胞内皮样改变受到抑制 | 第89-90页 |
| 4.4 讨论 | 第90-91页 |
| 4.5 小结 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-103页 |
| 综述 | 第103-121页 |
| 参考文献 | 第112-121页 |
| 致谢 | 第121-123页 |
| 附录 (攻读学位期间发表论文目录) | 第123页 |
