| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 1. 前言 | 第14-34页 |
| 1.1 茉莉酸信号途径研究进展 | 第14-22页 |
| 1.1.1 茉莉酸的生物合成及生理功能 | 第14-16页 |
| 1.1.2 COI1-JAZ-MYC2是茉莉酸信号途径的核心组件 | 第16-22页 |
| 1.2 巴西橡胶树乳管生物学研究进展 | 第22-27页 |
| 1.2.1 乳管的类型 | 第23页 |
| 1.2.2 乳管的细胞器 | 第23-25页 |
| 1.2.3 乳管发育及其影响因素 | 第25-27页 |
| 1.2.4 胶乳中植物防卫基因大量表达 | 第27页 |
| 1.3 巴西橡胶树乳管细胞天然橡胶生物合成调控的研究进展 | 第27-32页 |
| 1.3.1 天然橡胶生物合成的类异戊二烯代谢途径 | 第27-28页 |
| 1.3.2 橡胶生物合成关键酶 | 第28-30页 |
| 1.3.3 采胶和施用乙烯利对橡胶生物合成关键酶的影响 | 第30-32页 |
| 1.4 巴西橡胶树乳管细胞是研究特化组织(细胞)中的茉莉酸信号途径分子机制的优良模型 | 第32-33页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第33-34页 |
| 2. 材料与方法 | 第34-85页 |
| 2.1 植物材料 | 第34页 |
| 2.2 质粒与菌种 | 第34-36页 |
| 2.3 酵母培养用培养基 | 第36页 |
| 2.4 其他试剂 | 第36-37页 |
| 2.5 割胶树和未开割树胶乳茉莉酸含量的测定 | 第37-38页 |
| 2.5.1 样品采集 | 第37页 |
| 2.5.2 胶乳茉莉酸的提取 | 第37页 |
| 2.5.3 胶乳内源茉莉酸的GC-MS分析 | 第37-38页 |
| 2.6 茉莉酸对天然橡胶生物合成的影响 | 第38-39页 |
| 2.6.1 样品处理 | 第38页 |
| 2.6.2 天然橡胶的体外生物合成 | 第38页 |
| 2.6.3 ~(14)C含量的测定 | 第38-39页 |
| 2.7 橡胶树MYC基因和JAZ基因的克隆 | 第39-52页 |
| 2.7.1 胶乳总RNA的提取 | 第39-41页 |
| 2.7.2 cDNA第一链的合成 | 第41页 |
| 2.7.3 MYC基因和JAZ基因和保守区域的扩增 | 第41-44页 |
| 2.7.4 3’-RACE | 第44-47页 |
| 2.7.5 5’-RACE | 第47-49页 |
| 2.7.6 HblMYC基因和HbJAZ基因全长cDNA的克隆 | 第49-51页 |
| 2.7.7 橡胶树基因组DNA的提取 | 第51-52页 |
| 2.7.8 HblMYC和HbJAZ基因组全长的克隆 | 第52页 |
| 2.8 HblMYC和HbJAZ启动子的克隆 | 第52-56页 |
| 2.8.1 基因组DNA的提取与检验 | 第52页 |
| 2.8.2 基因组DNA的酶切与纯化 | 第52-53页 |
| 2.8.3 加接头反应 | 第53-54页 |
| 2.8.4 PCR-based DNA Walking | 第54-56页 |
| 2.9 REF、SRPP和HbJAZ1基因转录因子的鉴定 | 第56-73页 |
| 2.9.1 REF和SRPP启动子的扩增 | 第56页 |
| 2.9.2 REF、SRPP和HbJAZ1启动子Bait质粒的构建 | 第56-61页 |
| 2.9.3 REF、SRPP和HbJAZ1启动子Bait菌株的构建 | 第61-63页 |
| 2.9.4 Bait菌株AbA本底浓度确定 | 第63-64页 |
| 2.9.6 酵母单杂交cDNA文库的构建 | 第64-67页 |
| 2.9.7 Bait菌株与cDNA文库质粒的大规模杂交 | 第67-68页 |
| 2.9.8 阳性克隆的确定与互作分析 | 第68-69页 |
| 2.9.9 Prey质粒的构建 | 第69-72页 |
| 2.9.10 点对点酵母单杂交鉴定REF、SRPP和HbJAZ1的转录因子 | 第72-73页 |
| 2.10 HbCOI1和HbJAZ蛋白的相互作用的鉴定 | 第73-80页 |
| 2.10.1 Bait质粒和Prey质粒的构建 | 第73-76页 |
| 2.10.2 Bait菌株和Prey菌株的构建 | 第76-77页 |
| 2.10.3 Bait菌株的毒性实验和自激活实验 | 第77-78页 |
| 2.10.4 Bait菌株和Prey菌株的交配 | 第78-79页 |
| 2.10.5 HbJAZ家族成员之间相互作用的重复验证 | 第79页 |
| 2.10.6 COR对HbCOI1和HbJAZ相互作用的影响 | 第79-80页 |
| 2.11 HblMYC、HbCOI1、HbJAZ1和橡胶生物合成关键酶基因的表达分析 | 第80-85页 |
| 2.11.1 材料的处理 | 第80页 |
| 2.11.2 总RNA的提取 | 第80-81页 |
| 2.11.3 cDNA第一链的合成 | 第81页 |
| 2.11.4 荧光定量PCR | 第81-85页 |
| 3. 结果与分析 | 第85-158页 |
| 3.1 割胶对乳管细胞内源茉莉酸含量的影响 | 第85页 |
| 3.2 茉莉酸对天然橡胶生物合成的影响 | 第85-86页 |
| 3.3 HblMYC转录因子家族成员基因的克隆及序列分析 | 第86-98页 |
| 3.3.1 HblMYC转录因子家族成员全长cDNA的克隆 | 第86-91页 |
| 3.3.2 HblMYC基因的生物信息学分析 | 第91-98页 |
| 3.3.3 HblMYC基因内含子分析 | 第98页 |
| 3.4 HblMYC基因启动子的克隆和生物信息学分析 | 第98-103页 |
| 3.5 HbJAZ家族成员基因的克隆及序列分析 | 第103-120页 |
| 3.5.1 HbJAZ家族成员全长cDNA序列的克隆 | 第103-108页 |
| 3.5.2 HbJAZ基因的生物信息学分析 | 第108-115页 |
| 3.5.3 HbJAZ基因内含子分析 | 第115-120页 |
| 3.6 HbJAZ基因启动子的克隆和生物信息学分析 | 第120-125页 |
| 3.7 橡胶生物合成关键酶REF和SRPP基因的转录因子的鉴定 | 第125-137页 |
| 3.7.1 REF和SRPP基因启动子序列分析 | 第125-127页 |
| 3.7.2 文库筛选分离鉴定REF基因的转录因子 | 第127-133页 |
| 3.7.3 点对点酵母单杂交鉴定REF和SRPP基因的转录因子 | 第133-137页 |
| 3.8 HbJAZ1基因转录因子的鉴定 | 第137-139页 |
| 3.8.1 Bait菌株的构建 | 第137页 |
| 3.8.2 Bait菌株AbA本底浓度的确定 | 第137-138页 |
| 3.8.3 点对点酵母单杂交鉴定HbJAZ1基因的转录因子 | 第138-139页 |
| 3.9 HbCOI1和HbJAZ以及HbJAZ成员之间的相互作用 | 第139-147页 |
| 3.9.1 Bait载体和Prey载体的构建 | 第139页 |
| 3.9.2 Bait菌株和Prey菌株的构建 | 第139-140页 |
| 3.9.3 Bait菌株的毒性实验和自激活实验 | 第140-141页 |
| 3.9.4 HbJAZ家族成员之间的相互作用 | 第141-144页 |
| 3.9.5 HbCOI1和HbJAZ的相互作用 | 第144-147页 |
| 3.10 HblMYC、HbCOI1、HbJAZ1和橡胶生物合成关键酶基因的表达分析 | 第147-158页 |
| 3.10.1 RNA质量检测 | 第147页 |
| 3.10.2 引物特异性检测及其扩增效率 | 第147-148页 |
| 3.10.3 机械伤害和割胶对HblMYC转录因子家族成员基因表达的影响 | 第148-151页 |
| 3.10.4 机械伤害和割胶对HbCOI1和HbJAZ1基因表达的影响 | 第151-152页 |
| 3.10.5 机械伤害和割胶对橡胶生物合成关键酶基因表达的影响 | 第152-153页 |
| 3.10.6 茉莉酸和乙烯处理对HblMYC转录因子家族成员基因表达的影响 | 第153-155页 |
| 3.10.7 茉莉酸和乙烯处理对HbCOI1和HbJAZ1基因表达的影响 | 第155页 |
| 3.10.8 茉莉酸和乙烯处理对橡胶生物合成关键酶REF、SRPP、HMGR1、HbHRT2基因表达的影响 | 第155-156页 |
| 3.10.9 HblMYC家族成员基因的组织特异性表达分析 | 第156-158页 |
| 4. 讨论 | 第158-161页 |
| 4.1 橡胶树乳管细胞中存在茉莉酸信号途径的核心组件 | 第158页 |
| 4.2 橡胶树乳管细胞合成天然橡胶主要受茉莉酸信号途径调节 | 第158-161页 |
| 5. 结论 | 第161-162页 |
| 6. 创新之处 | 第162页 |
| 7. 后续研究 | 第162-163页 |
| 参考文献 | 第163-171页 |
| 附录 | 第171-172页 |
| 致谢 | 第172页 |
