| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 绪论 | 第17-35页 |
| 1.1 PRRS 流行情况概述 | 第17-18页 |
| 1.2 PRRSV 特征与变异 | 第18-24页 |
| 1.2.1 PRRSV 生物学特性 | 第18页 |
| 1.2.2 PRRSV 主要蛋白结构与功能研究 | 第18-22页 |
| 1.2.3 PRRSV 遗传变异研究 | 第22-24页 |
| 1.3 PRRS 免疫学研究进展 | 第24-31页 |
| 1.3.1 病毒免疫学研究 | 第24-29页 |
| 1.3.2 PRRSV 疫苗免疫学研究 | 第29-31页 |
| 1.4 PRRS 诊断方法研究进展 | 第31-34页 |
| 1.4.1 病原学诊断方法 | 第31-33页 |
| 1.4.2 血清学诊断方法 | 第33-34页 |
| 1.5 PRRS 防控技术与策略展望 | 第34页 |
| 1.6 本研究的目的意义 | 第34-35页 |
| 第二章 PRRSV 鉴别诊断方法的建立 | 第35-43页 |
| 2.1 材料与方法 | 第35-38页 |
| 2.1.1 毒株 | 第35页 |
| 2.1.2 主要仪器及试剂 | 第35-36页 |
| 2.1.3 检测引物设计 | 第36-37页 |
| 2.1.4 病毒核酸的提取 | 第37页 |
| 2.1.5 cDNA 的合成 | 第37页 |
| 2.1.6 ORF5、NSP2部分基因序列的PCR扩增及条件优化 | 第37页 |
| 2.1.7 PCR 扩增产物的克隆与测序 | 第37页 |
| 2.1.8 敏感性试验 | 第37-38页 |
| 2.1.9 特异性试验 | 第38页 |
| 2.1.10 重复性试验 | 第38页 |
| 2.1.11 符合性检验 | 第38页 |
| 2.2 结果 | 第38-40页 |
| 2.2.1 PRRSV Ⅰ/Ⅱ型鉴别 RT-PCR 扩增结果 | 第38页 |
| 2.2.2 PRRSV 传统/缺失株鉴别 RT-PCR 扩增结果 | 第38-39页 |
| 2.2.3 PCR各扩增条件优化 | 第39-40页 |
| 2.2.4 敏感性试验结果 | 第40页 |
| 2.2.5 特异性试验结果 | 第40页 |
| 2.2.6 重复性试验 | 第40页 |
| 2.2.7 符合性检验 | 第40页 |
| 2.3 讨论 | 第40-43页 |
| 第三章 基于重组 N 蛋白的抗体 ELISA 检测方法的建立 | 第43-49页 |
| 3.1 材料与方法 | 第43-45页 |
| 3.1.1 材料 | 第43-44页 |
| 3.1.2 间接 ELISA（iELISA）的反应程序 | 第44页 |
| 3.1.3 包被抗原及阳性抗体最佳工作浓度的确定 | 第44页 |
| 3.1.4 样品最佳稀释度的确定 | 第44页 |
| 3.1.5 iELISA 的检测特异性 | 第44-45页 |
| 3.1.6 iELISA的重复性 | 第45页 |
| 3.1.7 符合性检验 | 第45页 |
| 3.2 结果 | 第45-47页 |
| 3.2.1 抗原最佳包被浓度与阳性血清最佳稀释度的确定 | 第45页 |
| 3.2.2 样品最佳稀释度 | 第45页 |
| 3.2.3 特异性试验 | 第45-46页 |
| 3.2.4 重复性试验 | 第46-47页 |
| 3.2.5 符合性验证 | 第47页 |
| 3.3 讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 抗 PRRSV 单克隆抗体的制备与特性分析 | 第49-57页 |
| 4.1 材料与方法 | 第49-52页 |
| 4.1.1 材料 | 第49-50页 |
| 4.1.2 病毒的增殖与纯化 | 第50页 |
| 4.1.3 抗PRRSV杂交瘤细胞的制备 | 第50-51页 |
| 4.1.4 小鼠腹水的制备 | 第51页 |
| 4.1.5 单抗亚型鉴定 | 第51页 |
| 4.1.6 染色体分析 | 第51页 |
| 4.1.7 交叉反应性鉴定 | 第51-52页 |
| 4.1.8 间接免疫荧光染色鉴定 | 第52页 |
| 4.1.9 Western-blot 分析 | 第52页 |
| 4.1.10 单抗效价测定 | 第52页 |
| 4.1.11 抗体增强作用（ADE） | 第52页 |
| 4.1.12 病毒中和试验 | 第52页 |
| 4.2 结果 | 第52-55页 |
| 4.2.1 杂交瘤细胞及腹水的制备 | 第52-53页 |
| 4.2.2 单抗生物学特性鉴定结果 | 第53页 |
| 4.2.3 单抗特异性鉴定结果 | 第53页 |
| 4.2.4 免疫荧光染色结果 | 第53-54页 |
| 4.2.5 Western-blot 试验 | 第54页 |
| 4.2.6 抗体效价测定 | 第54页 |
| 4.2.7 抗体增强作用鉴定 | 第54页 |
| 4.2.8 病毒中和试验鉴定 | 第54-55页 |
| 4.3 讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 2007-2012年鲁豫冀地区PRRSV分离与鉴定 | 第57-65页 |
| 5.1 材料与方法 | 第57-59页 |
| 5.1.1 材料 | 第57页 |
| 5.1.2 病料处理 | 第57页 |
| 5.1.3 病毒分离培养 | 第57页 |
| 5.1.4 病毒 TCID50的测定 | 第57-58页 |
| 5.1.5 病毒噬斑试验 | 第58页 |
| 5.1.6 ORF5、NSP2基因RT-PCR鉴定 | 第58页 |
| 5.1.7 外源病毒试验 | 第58-59页 |
| 5.1.8 动物回归试验 | 第59页 |
| 5.2 结果 | 第59-61页 |
| 5.2.1 病毒的分离与增殖特性 | 第59页 |
| 5.2.2 病毒噬斑试验 | 第59-60页 |
| 5.2.3 病毒TCID50的测定 | 第60页 |
| 5.2.4 分离株 PCR 鉴定 | 第60-61页 |
| 5.2.5 外源病毒试验 | 第61页 |
| 5.2.6 分离株动物回归试验 | 第61页 |
| 5.3 讨论 | 第61-65页 |
| 5.3.1 病毒的分离成功率的影响因素 | 第61-62页 |
| 5.3.2 分离株特性比较 | 第62-63页 |
| 5.3.3 分离株致病能力 | 第63-65页 |
| 第六章 2007-2012 年山东及周边地区 PRRSV 流行情况分析 | 第65-73页 |
| 6.1 材料与方法 | 第65-67页 |
| 6.1.1 样本的采集与处理 | 第65页 |
| 6.1.2 试剂 | 第65-66页 |
| 6.1.3 检测方法 | 第66-67页 |
| 6.2 结果 | 第67-70页 |
| 6.2.1 4种主要病毒抗体检测情况 | 第67页 |
| 6.2.2 不同年度、地区 PRRSV 血清抗体情况 | 第67-68页 |
| 6.2.3 部分猪场中和抗体情况 | 第68页 |
| 6.2.4 病原核酸检测情况 | 第68-69页 |
| 6.2.5 混合感染情况 | 第69页 |
| 6.2.6 不同组织样品的检出率 | 第69-70页 |
| 6.3 讨论 | 第70-73页 |
| 6.3.1 血清学分析 | 第70-71页 |
| 6.3.2 病原学分析 | 第71页 |
| 6.3.3 混合感染 | 第71-72页 |
| 6.3.4 展望 | 第72-73页 |
| 第七章 山东及周边地区 PRRSV 分离株的遗传变异分析 | 第73-81页 |
| 7.1 材料与方法 | 第73-75页 |
| 7.1.1 细胞和菌株 | 第73页 |
| 7.1.2 主要试剂 | 第73页 |
| 7.1.3 样品 | 第73页 |
| 7.1.4 病毒的细胞分离与鉴定 | 第73-74页 |
| 7.1.5 ORF5 与部分 Nsp2 基因的扩增与克隆测序 | 第74页 |
| 7.1.6 GP5蛋白的氨基酸序列比较分析 | 第74-75页 |
| 7.1.7 Nsp2 蛋白的部分氨基酸序列比较分析 | 第75页 |
| 7.2 结果 | 第75-79页 |
| 7.2.1 病毒分离 | 第75页 |
| 7.2.2 ORF5 与部分 Nsp2 基因扩增与克隆测序 | 第75-76页 |
| 7.2.3 GP5 蛋白推导氨基酸序列的比较及遗传进化树分析 | 第76-78页 |
| 7.2.4 GP5 蛋白推导氨基酸基序的变异位点比较 | 第78页 |
| 7.2.5 Nsp2推导氨基酸序列的比较 | 第78页 |
| 7.2.6 Nsp2 推导氨基酸序列遗传进化树分析 | 第78-79页 |
| 7.3 讨论 | 第79-81页 |
| 结论 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-99页 |
| 导师简介 | 第99-101页 |
| 作者简介 | 第101-105页 |
| 致谢 | 第105页 |
