| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 丁二酸简介 | 第10-12页 |
| 1.1.1 丁二酸应用 | 第10页 |
| 1.1.2 丁二酸的理化性质 | 第10页 |
| 1.1.3 丁二酸的制备 | 第10-12页 |
| 1.2 研究进展及立题意义 | 第12-14页 |
| 1.3 本课题目标、研究内容及路线 | 第14-17页 |
| 1.3.1 本课题目标 | 第14页 |
| 1.3.2 本课题研究路线 | 第14-15页 |
| 1.3.3 本课题主要内容 | 第15-17页 |
| 参考文献 | 第17-20页 |
| 第二章 谷氨酸棒杆菌工程菌改造及丁二酸两阶段发酵 | 第20-46页 |
| 2.1 前言 | 第20-22页 |
| 2.1.1 磷酸烯醇式丙酮酸转化为草酰乙酸 | 第20页 |
| 2.1.2 丙酮酸节点的代谢 | 第20-21页 |
| 2.1.3 异柠檬酸节点的代谢 | 第21-22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.2.1 实验设备和仪器 | 第22-23页 |
| 2.2.2 主要实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.3 菌株和质粒 | 第24-25页 |
| 2.2.4 培养条件 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-34页 |
| 2.3.1 谷氨酸棒杆菌厌氧发酵生产有机酸的方法 | 第26页 |
| 2.3.2 乳酸脱氢酶基因和异柠檬酸裂解酶基因的敲除 | 第26-31页 |
| 2.3.3 设置培养温度梯度研究细胞状态的改变 | 第31页 |
| 2.3.4 生长曲线测定 | 第31页 |
| 2.3.5 粗酶提取液的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.6 异柠檬酸裂解酶(ICL)酶活测定 | 第32页 |
| 2.3.7 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PPC)酶活测定 | 第32页 |
| 2.3.8 丙酮酸羧化酶(PYC)酶活测定 | 第32-33页 |
| 2.3.9 苹果酸脱氢酶(MDH)酶活测定 | 第33页 |
| 2.3.10 蛋白酶浓度测定 | 第33-34页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第34-40页 |
| 2.4.1 乳酸脱氢酶基因和异柠檬酸裂解酶的敲除 | 第34页 |
| 2.4.2 PCR产物测序 | 第34-35页 |
| 2.4.3 基因敲除质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.4.4 谷氨酸棒杆菌两阶段发酵丁二酸结果分析 | 第36-39页 |
| 2.4.5 酶活测定结果及分析 | 第39-40页 |
| 2.5 小结 | 第40-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 第三章 结论与展望 | 第46-48页 |
| 3.1 结论 | 第46页 |
| 3.2 创新点 | 第46页 |
| 3.3 展望 | 第46-48页 |
| 作者简历 | 第48页 |