| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 引言 | 第16-22页 |
| 0.1 硒蛋白 | 第16-17页 |
| 0.2 阿尔茨海默病及其发病机理、研究意义 | 第17页 |
| 0.3 小胶质细胞、骨髓/血液来源单核细胞与阿尔茨海默病之间关系 | 第17-20页 |
| 0.4 硒蛋白与阿尔茨海默病之间关系的研究进展 | 第20页 |
| 0.5 研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 第1章 小鼠硒蛋白mSelK表达敲减慢病毒载体的构建 | 第22-32页 |
| 1.1 实验方案 | 第22页 |
| 1.2 实验材料和方法 | 第22-30页 |
| 1.2.1 分子生物学常用酶 | 第22页 |
| 1.2.2 菌种、细胞与质粒 | 第22-23页 |
| 1.2.3 实验仪器 | 第23页 |
| 1.2.4 常用试剂 | 第23-24页 |
| 1.2.5 pLKO.1-mSelK-ShRNA载体的构建 | 第24-28页 |
| 1.2.6 慢病毒包装 | 第28-30页 |
| 1.3 实验结果与分析 | 第30-31页 |
| 1.3.1 重组慢病毒载体的酶切验证 | 第30-31页 |
| 1.3.2 重组慢病毒载体的293T细胞包装结果 | 第31页 |
| 1.4 小结 | 第31-32页 |
| 第2章 慢病毒载体pLKO.1-mSelK-ShRNA对小胶质细胞和单核细胞的游离钙水平及迁移能力的影响 | 第32-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 2.1.1 细胞 | 第32页 |
| 2.1.2 培养基和试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.1.4 常用生化试剂 | 第34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-43页 |
| 2.2.1 细胞的培养 | 第34-35页 |
| 2.2.2 慢病毒载体mSelK-ShRNA侵染侵染小胶质细胞和单核细胞 | 第35页 |
| 2.2.3 RT-PCR法考察细胞内mSelK基因敲减后mRNA表达的变化 | 第35-38页 |
| 2.2.4 实时定量PCR法考察细胞内mSelK基因沉默后mRNA表达的变化 | 第38-40页 |
| 2.2.5 MTT法检测慢病毒侵染后的细胞活力 | 第40-41页 |
| 2.2.6 慢病毒侵染后细胞活化程度的NO测定 | 第41-42页 |
| 2.2.7 慢病毒载体侵染对小胶质细胞和单核细胞胞浆中游离钙离子浓度的影响 | 第42页 |
| 2.2.8 慢病毒载体侵染对小胶质细胞和单核细胞迁移能力的影响 | 第42-43页 |
| 2.3 实验结果 | 第43-50页 |
| 2.3.1 mSelK-ShRNA慢病毒重组载体侵染BV2及RAW264.7的最佳MOI | 第43-44页 |
| 2.3.2 RNA完整性鉴定 | 第44页 |
| 2.3.3 RT-PCR法考察细胞内mSelK基因沉默后mRNA表达的变化 | 第44-45页 |
| 2.3.4 实时定量PCR法考察细胞内mSelK基因沉默后mRNA表达的变化 | 第45-46页 |
| 2.3.5 mSelK-ShRNA慢病毒重组载体侵染对小胶质细胞活力的影响 | 第46-47页 |
| 2.3.6 mSelK-ShRNA慢病毒重组载体侵染对非刺激条件下小胶质细胞活化的影响 | 第47-48页 |
| 2.3.7 mSelK-ShRNA慢病毒重组载体侵染对小胶质细胞和单核细胞胞浆游离Ca~(2+)浓度的影响 | 第48-49页 |
| 2.3.8 mSelK-ShRNA慢病毒载体侵染BV2细胞迁移能力的影响 | 第49页 |
| 2.3.9 mSelK-ShRNA慢病毒载体侵染RAW264.7细胞迁移能力的影响 | 第49-50页 |
| 2.4 分析与讨论 | 第50页 |
| 2.5 小结 | 第50-51页 |
| 第3章 mSelK过表达腺病毒重组载体对小胶质细胞中游离钙水平及迁移能力的影响 | 第51-75页 |
| 3.1 实验材料 | 第51-53页 |
| 3.1.1 细胞 | 第51页 |
| 3.1.2 培养基和试剂 | 第51-52页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第52-53页 |
| 3.2 实验方法 | 第53-65页 |
| 3.2.1 细胞的培养 | 第53页 |
| 3.2.2 mSelK过表达腺病毒重组载体pHBAd-mSelK的扩增 | 第53-54页 |
| 3.2.3 腺病毒TCID50病毒滴度测定 | 第54-55页 |
| 3.2.4 用mSelK过表达腺病毒重组载体侵染小胶质细胞 | 第55页 |
| 3.2.5 MTT法检测腺病毒侵染后的细胞活力 | 第55-56页 |
| 3.2.6 Gress法检测非刺激条件下腺病毒侵染对细胞活化状态的影响 | 第56页 |
| 3.2.7 mSelK过表达腺病毒重组载体侵染对小胶质细胞胞浆中游离钙离子浓度的影响 | 第56页 |
| 3.2.8 mSelK过表达腺病毒重组载体侵染对小胶质细胞细胞迁移能力的影响 | 第56-57页 |
| 3.2.9 Western Blot法考察细胞内mSelK过表达腺病毒重组载体侵染对小胶质细胞mSelK蛋白表达量的影响 | 第57-64页 |
| 3.2.10 Western Blot考察脂多糖LPS刺激对小鼠硒蛋白mSelK的剪切状态及表达量的影响 | 第64-65页 |
| 3.3 实验结果 | 第65-73页 |
| 3.3.1 pHBAd-MCMV-RFP-SelK重组载体测序结果 | 第65-66页 |
| 3.3.2 mSelK过表达腺病毒重组载体pHBAd-mSelK的扩增 | 第66-67页 |
| 3.3.3 扩增后腺病毒TCID50病毒滴度测定 | 第67-68页 |
| 3.3.4 腺病毒Ad-mSelK过表达载体侵染小胶质细胞的MOI | 第68-69页 |
| 3.3.5 MTT法检测腺病毒侵染后的细胞活力 | 第69-70页 |
| 3.3.6 腺病毒侵染对非刺激条件下细胞活化状态的影响 | 第70页 |
| 3.3.7 腺病毒重组载体侵染对BV2细胞胞浆中游离钙离子浓度的影响 | 第70-71页 |
| 3.3.8 腺病毒重组载体侵染对细胞迁移能力的影响 | 第71-72页 |
| 3.3.9 BCA蛋白定量分析结果 | 第72-73页 |
| 3.3.10 腺病毒重组载体Ad-mSelK侵染小胶质细胞后,细胞中硒蛋白mSelK表达量升高的验证 | 第73页 |
| 3.4 分析与讨论 | 第73-74页 |
| 3.5 小结 | 第74-75页 |
| 结论与展望 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 攻读学位期间发表学术论文及参加科研情况 | 第81页 |
