| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-15页 |
| 1.1 2,3-丁二醇与乙偶姻的相关性质及应用 | 第9-10页 |
| 1.2 2,3-丁二醇与乙偶姻的合成方法概述 | 第10-11页 |
| 1.3 谷氨酸棒状杆菌的代谢特征 | 第11-12页 |
| 1.4 2,3-丁二醇和乙偶姻的代谢生理意义 | 第12-13页 |
| 1.5 提高 2,3-丁二醇和乙偶姻合成的代谢工程策略 | 第13页 |
| 1.6 本文选题背景和主要研究内容 | 第13-15页 |
| 1.6.1 选题背景 | 第13-14页 |
| 1.6.2 本课题主要研究内容和研究意义 | 第14-15页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第15-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-22页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第15-16页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.3 实验药品 | 第17-19页 |
| 2.1.4 溶液配制方法 | 第19-21页 |
| 2.1.5 培养基配制方法 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-36页 |
| 2.2.1 菌株培养和发酵方法 | 第22-23页 |
| 2.2.2 利用CaCl_2法制备大肠杆菌DH5α 感受态细胞和转化过程 | 第23-24页 |
| 2.2.3 制备谷氨酸棒状杆菌的感受态细胞和转化 | 第24-25页 |
| 2.2.4 谷氨酸棒状杆菌或大肠杆菌的质粒提取方法 | 第25-26页 |
| 2.2.5 基因组DNA提取方法 | 第26-27页 |
| 2.2.6 DNA片段回收纯化方法 | 第27页 |
| 2.2.7 PCR反应体系的配制与反应方法 (目标片段扩增) | 第27-29页 |
| 2.2.8 DNA片段切胶回收方法 | 第29页 |
| 2.2.9 限制性内切酶反应体系的配制方法 | 第29-30页 |
| 2.2.10 DNA片段连接方法 | 第30-31页 |
| 2.2.11 琼脂糖凝胶电泳操作方法 | 第31页 |
| 2.2.12 目的基因敲除方法 | 第31-34页 |
| 2.2.13 菌液PCR操作方法 | 第34-35页 |
| 2.2.14 引物设计和基因测序 | 第35-36页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第36-69页 |
| 3.1 C. glutamicum ATCC 13032 WT与SAT7的代谢工程改造 | 第38-50页 |
| 3.1.1 WT与SAT7的butA基因敲除 | 第38-40页 |
| 3.1.2 过表达乙偶姻合成途径的质粒载体说明 | 第40页 |
| 3.1.3 D-2,3-丁二醇合成途径的过表达质粒构建 | 第40-44页 |
| 3.1.3.1 合成D-2,3-丁二醇的过表达质粒构建(不含NADH转氢酶编码基因) | 第40-42页 |
| 3.1.3.2 共表达转氢酶编码基因udhA和D-2,3-丁二醇合成途径的过表达质粒构建 | 第42-44页 |
| 3.1.4 meso-2,3-丁二醇合成途径的过表达质粒构建 | 第44-46页 |
| 3.1.4.1 合成meso-2,3-丁二醇的过表达质粒构建(不含NADH转氢酶编码基因) | 第44-45页 |
| 3.1.4.2 共表达转氢酶编码基因udhA和meso-2,3-丁二醇合成途径的过表达质粒构建 | 第45-46页 |
| 3.1.5 过表达谷氨酸棒状杆菌butA基因的质粒构建 | 第46-47页 |
| 3.1.6 pEC-XK99E-alsSD- nox质粒的构建 | 第47-48页 |
| 3.1.7 过表达质粒电转化谷氨酸棒状杆菌 | 第48-50页 |
| 3.2 工程菌株发酵结果 | 第50-69页 |
| 3.2.1 发酵条件的简要分析 | 第50-51页 |
| 3.2.1.1 发酵培养基的选择 | 第50页 |
| 3.2.1.2 发酵转速的选择 | 第50-51页 |
| 3.2.1.3 发酵初始糖浓度的选择 | 第51页 |
| 3.2.2 发酵结果分析与讨论 | 第51-69页 |
| 3.2.2.1 乙偶姻生产菌株的结果分析与讨论 | 第51-57页 |
| 3.2.2.2 D-2,3-丁二醇生产菌株的结果分析与讨论 | 第57-61页 |
| 3.2.2.3 meso-2,3-丁二醇生产菌株的结果分析与讨论 | 第61-66页 |
| 3.2.2.4 过表达butA基因生产菌株的结果分析与讨论 | 第66-69页 |
| 第四章 结论与展望 | 第69-72页 |
| 4.1 实验结果总结 | 第69-70页 |
| 4.2 展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
