| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 miRNA概述 | 第11-13页 |
| 1.1.1 miRNA的产生过程 | 第11页 |
| 1.1.2 miRNA的作用机制 | 第11-12页 |
| 1.1.3 miRNA的研究方法 | 第12页 |
| 1.1.4 miRNA的靶基因的预测与鉴定 | 第12-13页 |
| 1.2 骨骼肌的发育机制 | 第13-17页 |
| 1.2.1 骨骼肌的生成与发育的一般规律 | 第13页 |
| 1.2.2 骨骼肌纤维的结构及分类 | 第13-14页 |
| 1.2.3 影响肌纤维类型的因素 | 第14-15页 |
| 1.2.4 影响肌纤维转化的分子机制研究 | 第15-16页 |
| 1.2.5 影响肌纤维转化的miRNAs | 第16-17页 |
| 1.3 miR-208b和miR-499的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二章 巴马香猪骨骼肌发育过程中miR-208b和miR-499及MyHC基因的表达规律检测 | 第19-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂、耗材 | 第19页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-22页 |
| 2.2.1 巴马香猪组织总RNA的提取 | 第19-20页 |
| 2.2.2 miRNA表达的定量检测 | 第20-21页 |
| 2.2.3 mRNA表达的定量检测 | 第21页 |
| 2.2.4 数据统计与分析 | 第21-22页 |
| 2.3 结果与分析 | 第22-25页 |
| 2.3.1 巴马香猪各组织总RNA的提取 | 第22页 |
| 2.3.2 miR-208b和miR-499的组织表达谱 | 第22-23页 |
| 2.3.3 背最长肌不同时期miR-208b和miR-499的表达规律 | 第23页 |
| 2.3.4 背最长肌不同时期MyHC的表达规律 | 第23-25页 |
| 2.3.5 AMPK、PGC-1α的表达与MyHC基因表达的相关性分析 | 第25页 |
| 2.4 讨论 | 第25-27页 |
| 2.4.1 巴马香猪miR-208b和miR-499的组织表达谱和背最长肌的时空表达规律 | 第25-26页 |
| 2.4.2 巴马香猪背最长肌MyHC表达规律 | 第26-27页 |
| 2.4.3 胚胎期AMPK与PGC-1α的表达 | 第27页 |
| 2.5 小结 | 第27-28页 |
| 第三章 miR-208b、miR-499病毒表达载体的构建 | 第28-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 3.1.1 载体、细胞 | 第28页 |
| 3.1.2 实验试剂、耗材 | 第28页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第28-29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-36页 |
| 3.2.1 C2C12、293T、Phoenix细胞的培养 | 第29页 |
| 3.2.2 pre-miRNA的克隆 | 第29-31页 |
| 3.2.3 病毒表达载体的构建 | 第31-33页 |
| 3.2.4 包装病毒 | 第33-35页 |
| 3.2.5 重组质粒的表达验证 | 第35-36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-43页 |
| 3.3.1 巴马香猪基因组DNA的提取 | 第36页 |
| 3.3.2 Pre-miRNA的克隆 | 第36-38页 |
| 3.3.3 病毒表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.3.4 病毒包装及感染结果 | 第39-40页 |
| 3.3.5 转染C2C12 | 第40-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-44页 |
| 3.4.1 miR-208b、miR-499的序列分析 | 第43页 |
| 3.4.2 细胞的过表达 | 第43-44页 |
| 3.5 小结 | 第44-45页 |
| 第四章 miR-208b和miR-499的功能分析 | 第45-65页 |
| 4.1 材料与方法 | 第45页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第45页 |
| 4.1.2 实验材料 | 第45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-49页 |
| 4.2.1 新生小鼠肌肉卫星细胞的分离,培养 | 第45-46页 |
| 4.2.2 C2C12的分化诱导 | 第46页 |
| 4.2.3 miR-208b、miR-499的功能研究 | 第46-48页 |
| 4.2.4 数据统计与分析 | 第48-49页 |
| 4.3 结果与分析 | 第49-62页 |
| 4.3.1 C2C12细胞的培养及诱导分化结果 | 第49-50页 |
| 4.3.2 小鼠肌肉卫星细胞分离、培养及诱导分化结果 | 第50-51页 |
| 4.3.3 C2C12、肌肉卫星细胞分化过程miR-208b、miR-499的表达变化 | 第51-52页 |
| 4.3.4 miR-208b和miR-499的功能分析 | 第52-62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-64页 |
| 4.4.1 体外肌细胞分化过程中miR-208b、miR-499的表达规律 | 第62页 |
| 4.4.2 过表达miR-208b、miR-499后MyHC基因、MyoG基因的表达变化 | 第62-63页 |
| 4.4.3 过表达miR-208b、miR-499后AMPK、PGC-1α的表达变化 | 第63-64页 |
| 4.5 小结 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第73页 |
