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基于ORF文库技术的乳腺癌吉西他滨耐药基因谱高通量筛选

附录第5-6页
中文摘要第6-8页
英文摘要第8-9页
前言第10-13页
材料与方法第13-25页
    1. 材料第13-15页
        1.1 主要仪器设备第13页
        1.2 细胞培养所需试剂第13-14页
        1.3 细胞增殖毒性检测所需试剂第14页
        1.4 候选基因过表达质粒库的构建所需试剂第14页
        1.5 二代测序所需试剂第14页
        1.6 定量PCR所需试剂第14页
        1.7 细胞株、菌株及质粒第14-15页
    2. 方法第15-25页
        2.1 细胞培养与传代第15页
        2.2 细胞毒实验检测药物对细胞的半数抑制浓度第15页
        2.3 DNA-条形码库(Barcode库)和带Barcode的目的载体质粒库的构建第15-18页
        2.4 候选基因过表达质粒的构建第18-19页
        2.5 候选基因过表达质粒库的构建第19页
        2.6 候选基因过表达质粒库的转染第19-21页
        2.7 二代测序样本的制备第21-22页
        2.8 RNA提取、逆转录及实时定量PCR分析m RNA表达水平第22-24页
        2.9 统计分析第24-25页
结果第25-34页
    1. 乳腺癌耐药细胞株MDA231Gem的验证及生物学分析第25-26页
        1.1 耐药细胞株的验证第25页
        1.2 耐药细胞株表达谱芯片数据分析第25-26页
    2. 建立三阴性乳腺癌细胞吉西他滨耐药相关候选基因过表达质粒库,质粒库病毒包装后感染、吉西他滨耐药筛选第26-29页
        2.1 建立三阴性乳腺癌细胞吉西他滨耐药相关候选基因过表达质粒库第26-28页
        2.2 质粒库病毒包装后感染、吉西他滨耐药筛选第28-29页
    3. illumina? nextseq TM500二代测序和生物信息学筛选耐药靶点基因第29-32页
    4. 不同候选耐药靶基因对乳腺癌细胞吉西他滨抵抗性的影响第32-34页
        4.1 候选耐药靶点基因定量PCR分析验证第32页
        4.2 不同候选耐药靶基因对乳腺癌细胞吉西他滨抵抗性的影响第32-34页
讨论第34-39页
结论第39-40页
参考文献第40-45页
综述第45-54页
    参考文献第49-54页
致谢第54页

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