附录 | 第5-6页 |
中文摘要 | 第6-8页 |
英文摘要 | 第8-9页 |
前言 | 第10-13页 |
材料与方法 | 第13-25页 |
1. 材料 | 第13-15页 |
1.1 主要仪器设备 | 第13页 |
1.2 细胞培养所需试剂 | 第13-14页 |
1.3 细胞增殖毒性检测所需试剂 | 第14页 |
1.4 候选基因过表达质粒库的构建所需试剂 | 第14页 |
1.5 二代测序所需试剂 | 第14页 |
1.6 定量PCR所需试剂 | 第14页 |
1.7 细胞株、菌株及质粒 | 第14-15页 |
2. 方法 | 第15-25页 |
2.1 细胞培养与传代 | 第15页 |
2.2 细胞毒实验检测药物对细胞的半数抑制浓度 | 第15页 |
2.3 DNA-条形码库(Barcode库)和带Barcode的目的载体质粒库的构建 | 第15-18页 |
2.4 候选基因过表达质粒的构建 | 第18-19页 |
2.5 候选基因过表达质粒库的构建 | 第19页 |
2.6 候选基因过表达质粒库的转染 | 第19-21页 |
2.7 二代测序样本的制备 | 第21-22页 |
2.8 RNA提取、逆转录及实时定量PCR分析m RNA表达水平 | 第22-24页 |
2.9 统计分析 | 第24-25页 |
结果 | 第25-34页 |
1. 乳腺癌耐药细胞株MDA231Gem的验证及生物学分析 | 第25-26页 |
1.1 耐药细胞株的验证 | 第25页 |
1.2 耐药细胞株表达谱芯片数据分析 | 第25-26页 |
2. 建立三阴性乳腺癌细胞吉西他滨耐药相关候选基因过表达质粒库,质粒库病毒包装后感染、吉西他滨耐药筛选 | 第26-29页 |
2.1 建立三阴性乳腺癌细胞吉西他滨耐药相关候选基因过表达质粒库 | 第26-28页 |
2.2 质粒库病毒包装后感染、吉西他滨耐药筛选 | 第28-29页 |
3. illumina? nextseq TM500二代测序和生物信息学筛选耐药靶点基因 | 第29-32页 |
4. 不同候选耐药靶基因对乳腺癌细胞吉西他滨抵抗性的影响 | 第32-34页 |
4.1 候选耐药靶点基因定量PCR分析验证 | 第32页 |
4.2 不同候选耐药靶基因对乳腺癌细胞吉西他滨抵抗性的影响 | 第32-34页 |
讨论 | 第34-39页 |
结论 | 第39-40页 |
参考文献 | 第40-45页 |
综述 | 第45-54页 |
参考文献 | 第49-54页 |
致谢 | 第54页 |