| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-32页 |
| 1.1 腈水解酶 | 第12-15页 |
| 1.1.1 腈水解酶的来源和作用机理 | 第12-13页 |
| 1.1.2 腈水解酶的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.3 腈水解酶的目前发展状况 | 第14-15页 |
| 1.2 固定化酶 | 第15-20页 |
| 1.2.1 固定化载体 | 第15-16页 |
| 1.2.2 固定化方法 | 第16-20页 |
| 1.3 金属螯合亲和载体固定法 | 第20-27页 |
| 1.3.1 金属亲和载体的构成 | 第21-24页 |
| 1.3.2 IMAC中影响蛋白质吸附和洗脱的因素 | 第24-25页 |
| 1.3.3 金属螯合亲和层析技术的应用 | 第25-27页 |
| 1.4 本课题的意义及小结 | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-32页 |
| 第二章 腈水解酶催化扁桃腈及其衍生物的研究 | 第32-46页 |
| 2.1 引言 | 第32页 |
| 2.2 材料与方法 | 第32-34页 |
| 2.2.1 菌种和培养基 | 第32-33页 |
| 2.2.2 仪器与试剂 | 第33页 |
| 2.2.3 分析方法 | 第33-34页 |
| 2.2.4 反应产率(c)、对映体过量值(e.e)和对映体选择率(E)测定 | 第34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-36页 |
| 2.3.1 腈水解酶的纯化 | 第34-35页 |
| 2.3.2 不同酶量对反应的影响 | 第35页 |
| 2.3.3 不同pH对酶促反应的影响 | 第35页 |
| 2.3.4 不同温度对酶促反应的影响 | 第35-36页 |
| 2.3.5 不同底物浓度对酶促反应的影响 | 第36页 |
| 2.4 结果讨论与分析 | 第36-43页 |
| 2.4.1 腈水解酶的纯化结果 | 第36页 |
| 2.4.2 不同酶量对反应的影响 | 第36-37页 |
| 2.4.3 不同pH对酶促反应的影响 | 第37-39页 |
| 2.4.4 温度对反应的影响 | 第39-40页 |
| 2.4.5 底物浓度对反应的影响 | 第40-42页 |
| 2.4.6 四种不同底物与酶的对接情况 | 第42-43页 |
| 2.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-46页 |
| 第三章 腈水解酶的固定化条件研究 | 第46-64页 |
| 3.1 引言 | 第46-47页 |
| 3.2 主要实验材料和仪器 | 第47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-51页 |
| 3.3.1 载体制备 | 第47-48页 |
| 3.3.2 酶的固定化方法 | 第48页 |
| 3.3.3 酶活力测定方法 | 第48-49页 |
| 3.3.4 检测方法 | 第49页 |
| 3.3.4.1 扁桃酸及其衍生物的检测 | 第49页 |
| 3.3.4.2 扁桃酸及其衍生物的手性检测 | 第49页 |
| 3.3.5 固定化酶的制备 | 第49-50页 |
| 3.3.5.1 螫合不同金属离子的载体对酶固定化的影响 | 第49页 |
| 3.3.5.2 螯合不同浓度的离子对酶固定化的影响 | 第49页 |
| 3.3.5.3 溶液离子浓度对酶固定化的影响 | 第49页 |
| 3.3.5.4 给酶量对酶固定化的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.5.5 pH对酶固定化的影响 | 第50页 |
| 3.3.5.6 温度对酶固定化的影响 | 第50页 |
| 3.3.5.7 固定化时间对酶固定化的影响 | 第50页 |
| 3.3.5.8 载体和固定化酶的电子扫描显微镜表征 | 第50页 |
| 3.3.6 固定化酶的性质研究 | 第50-51页 |
| 3.3.6.1 固定化酶的最适pH和pH稳定性 | 第50页 |
| 3.3.6.2 固定化酶的最适温度和温度稳定性 | 第50-51页 |
| 3.3.6.3 金属离子对固定化酶的影响 | 第51页 |
| 3.3.6.4 固定化酶的操作稳定性 | 第51页 |
| 3.3.6.5 固定化酶和游离腈水解酶的动力学常数 | 第51页 |
| 3.3.6.6 固定化酶的储存稳定性 | 第51页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第51-61页 |
| 3.4.1 螯合不同金属离子的载体对酶固定化的影响 | 第51-52页 |
| 3.4.2 螯合不同浓度的离子对酶固定化的影响 | 第52页 |
| 3.4.3 溶液离子浓度对酶固定化的影响 | 第52-53页 |
| 3.4.4 给酶量对酶固定化的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.5 pH对酶固定化的影响 | 第54-55页 |
| 3.4.6 温度对酶固定化的影响 | 第55页 |
| 3.4.7 固定化时间对酶固定化的影响 | 第55-56页 |
| 3.4.8 载体和固定化酶的电子扫描显微镜表征 | 第56-57页 |
| 3.4.9 固定化酶的最适pH和pH稳定性 | 第57页 |
| 3.4.10 固定化酶的最适温度和温度稳定性 | 第57-58页 |
| 3.4.11 金属离子对固定化酶的影响 | 第58-59页 |
| 3.4.12 固定化酶的操作稳定性 | 第59-60页 |
| 3.4.13 固定化酶和游离酶的储存稳定性 | 第60-61页 |
| 3.4.14 固定化酶和游离腈水解酶的动力学常数 | 第61页 |
| 3.5 本章小结 | 第61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 第四章 固定化酶催化扁桃腈及其衍生物的条件研究 | 第64-78页 |
| 4.1 引言 | 第64页 |
| 4.2 材料与方法 | 第64-65页 |
| 4.2.1 菌种 | 第64页 |
| 4.2.2 培养基 | 第64-65页 |
| 4.2.3 游离腈水解酶液的制备 | 第65页 |
| 4.2.4 固定化酶的制备 | 第65页 |
| 4.2.5 分析方法及酶活定义 | 第65页 |
| 4.2.6 反应得率(c)、对映体过量值(e. e.) | 第65页 |
| 4.3 实验方法 | 第65-66页 |
| 4.3.1 不同pH对转化影响 | 第65页 |
| 4.3.2 温度对转化的影响 | 第65页 |
| 4.3.3 离子强度对转化的影响 | 第65-66页 |
| 4.3.4 固定化酶的浓度对转化的影响 | 第66页 |
| 4.3.5 底物浓度对转化的影响 | 第66页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第66-75页 |
| 4.4.1 pH对转化的影响 | 第66-67页 |
| 4.4.2 不同离子强度对扁桃酸转化的影响 | 第67-68页 |
| 4.4.3 不同温度对转化的影响 | 第68-70页 |
| 4.4.4 不同加酶量对催化的影响 | 第70-71页 |
| 4.4.5 不同底物浓度对催化的影响 | 第71-75页 |
| 4.5 本章小结 | 第75页 |
| 参考文献 | 第75-78页 |
| 第五章 结论与展望 | 第78-82页 |
| 5.1 结论 | 第78-79页 |
| 5.2 展望 | 第79-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文及专利情况 | 第83页 |
