| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-32页 |
| 第一节 常用的蛋白质相互作用体外检测方法 | 第9-11页 |
| ·GST pull-down | 第9页 |
| ·Co-Immunoprecipitation | 第9-11页 |
| 第二节 P53 的稳定与激活 | 第11-15页 |
| ·多种刺激条件引起p53 的翻译后修饰和稳定 | 第11-12页 |
| ·P53 稳定和激活机制的经典模型 | 第12-13页 |
| ·P53 稳定与活化经典模型的补充 | 第13-15页 |
| 第三节 MCM 蛋白家族 | 第15-20页 |
| ·MCM 家族蛋白的发现和系统进化分析 | 第15-17页 |
| ·MCM 蛋白的氨基酸序列特征 | 第17-18页 |
| ·MCM 蛋白的生物化学性质 | 第18-19页 |
| ·MCM2-7 六聚体解旋酶复合物 | 第19-20页 |
| 第四节 MCM 蛋白功能 | 第20-32页 |
| ·DNA 复制起始 | 第20页 |
| ·MCM 蛋白参与DNA 复制起始和延伸 | 第20-23页 |
| ·MCM2-7 解旋酶的功能调控 | 第23-27页 |
| ·微小染色体维持蛋白MCM5 | 第27-32页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第32-42页 |
| 第一节 实验材料 | 第32页 |
| 第二节 常用实验技术及方法 | 第32-42页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第32-33页 |
| ·DNA 样品的琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·DNA 的酶切、回收、连接与转化 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA 的小规模提取 | 第35页 |
| ·细胞培养和瞬时转染 | 第35-37页 |
| ·收获细胞及蛋白样品制备 | 第37页 |
| ·GST pull-down 实验 | 第37-39页 |
| ·免疫共沉淀 | 第39页 |
| ·蛋白质分离的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第39-41页 |
| ·Western Blotting | 第41-42页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第42-49页 |
| 第一节 GST pull-down 和质谱分析表明MCM5 是p53N60 结合蛋白 | 第42-43页 |
| 第二节 人源 MCM5 基因的克隆和重组质粒构建 | 第43-44页 |
| 第三节 GFP-MCM5 的真核表达 | 第44页 |
| 第四节 GST pull-down 验证p53 与MCM5 结合 | 第44页 |
| 第五节 免疫共沉淀验证p53 与MCM5 间的相互作用 | 第44-45页 |
| 第六节 讨论 | 第45-49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
