中文摘要 | 第4-5页 |
英文摘要 | 第5-6页 |
缩略词表 | 第10-12页 |
第一章 前言 | 第12-17页 |
1 Gadd45a的表达调控机制 | 第12页 |
2 Gadd45a在维持基因组稳定性中的作用 | 第12-14页 |
2.1 参与DNA修复 | 第13页 |
2.2 调控细胞周期 | 第13页 |
2.3 诱导凋亡 | 第13-14页 |
3 Gadd45a与去甲基化 | 第14页 |
4 Gadd45a与肿瘤 | 第14-16页 |
4.1 Gadd45a维持基因组稳定性功能与肿瘤 | 第15页 |
4.2 Gadd45a对肿瘤发生发展的抑制 | 第15-16页 |
5 本文研究目的 | 第16-17页 |
第二章 材料与方法 | 第17-32页 |
1 实验材料 | 第17-23页 |
1.1 菌种、质粒及细胞株 | 第17页 |
1.2 主要试剂 | 第17-19页 |
1.3 主要仪器设备 | 第19-20页 |
1.4 引物的合成与设计 | 第20页 |
1.5 siRNA | 第20-21页 |
1.6 重要试剂的配制 | 第21-23页 |
2 研究方法 | 第23-32页 |
2.1 对细胞的处理 | 第23-24页 |
2.2 siRNA瞬时转染细胞 | 第24页 |
2.3 细胞基因组DNA、总蛋白和总RNA的提取 | 第24-25页 |
2.4 RNA和蛋白的浓度测定 | 第25-26页 |
2.5 RT-PCR | 第26-27页 |
2.6 胶回收纯化 | 第27页 |
2.7 制备感受态细胞 | 第27页 |
2.8 转化 | 第27页 |
2.9 Western Blotting | 第27-28页 |
2.10 质粒提取 | 第28-29页 |
2.11 DNA亚硫酸氢盐修饰及纯化 | 第29-30页 |
2.12 细胞粘附实验 | 第30页 |
2.13 划痕实验 | 第30-31页 |
2.14 细胞跨膜迁移实验 | 第31页 |
2.15 细胞跨膜侵袭实验 | 第31-32页 |
第三章 实验结果 | 第32-51页 |
1. Gadd45a抑制MEF细胞的体外黏附能力 | 第32-33页 |
2. Gadd45a抑制MEF细胞的体外迁移和侵袭能力 | 第33-35页 |
3. Gadd45a降低体外培养HepG2细胞的迁移和侵袭能力 | 第35-37页 |
4. 表达谱芯片研究Gadd45a影响MEF细胞中大量基因的表达 | 第37-42页 |
5. Real-time PCR验证芯片中与细胞迁移及侵袭相关的基因 | 第42-44页 |
6. 比较基因组杂交对MEF细胞中染色体畸变的分析 | 第44-46页 |
7. 甲基化芯片检测MEF细胞中表观遗传学改变 | 第46-47页 |
8. 对验证基因启动子区甲基化变化的验证 | 第47-51页 |
第四章 讨论 | 第51-59页 |
1. Gadd45a抑制细胞的体外迁移和侵袭能力 | 第52页 |
2. 表达谱芯片研究Gadd45a影响MEF细胞中大量基因的表达 | 第52-53页 |
3. Real-time PCR验证芯片中与细胞迁移及侵袭相关的基因 | 第53-55页 |
4. 基因组不稳定性与表达改变 | 第55-56页 |
5. 表观遗传学与表达改变 | 第56-59页 |
5.1 碱基切除修复途径(BER) | 第57页 |
5.2 核苷酸切除修复途径(NER) | 第57-59页 |
参考文献 | 第59-69页 |
综述 | 第69-80页 |
参考文献 | 第75-80页 |
攻读学位期间主要的研究成果 | 第80-81页 |
致谢 | 第81页 |