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小花碱茅遗传转化体系的建立和PtHAK5编码基因的克隆及功能验证

英文缩写第3-4页
中文摘要第4-6页
Abstract第6-7页
第一章 引言第11-14页
第二章 国内外研究进展第14-30页
    2.1 禾本科植物遗传转化的方法第14-16页
        2.1.1 直接转化原生质体第14页
        2.1.2 基因枪法第14-15页
        2.1.3 农杆菌介导法第15页
        2.1.4 匍匐茎直接转化法第15-16页
    2.2 农杆菌介导单子叶植物转化的影响因素第16-19页
        2.2.1 农杆菌菌株类型第16页
        2.2.2 vir诱导类化合物第16-17页
        2.2.3 外植体的生理状态第17页
        2.2.4 伤口响应第17-18页
        2.2.5 侵染和共培养条件第18-19页
    2.3 转基因技术在禾本科草类植物中的潜在应用第19-23页
        2.3.1 改善牧草营养品质第19-20页
        2.3.2 非生物胁迫第20-22页
        2.3.3 杂草和病虫害的控制第22-23页
        2.3.4 生长和养分利用特性的改善第23页
    2.4 农杆菌介导几类禾本科谷物的遗传转化进展第23-27页
        2.4.1 水稻第23-24页
        2.4.2 小麦第24页
        2.4.3 玉米第24-25页
        2.4.4 大麦第25页
        2.4.5 高粱第25-26页
        2.4.6 二穗短柄草第26页
        2.4.7 其他草类第26-27页
    2.5 KT/KUP/HAK家族第27-30页
        2.5.1 命名和结构第27-28页
        2.5.2 系统进化分析第28页
        2.5.3 表达与功能研究第28-30页
第三章 小花碱茅遗传转化体系的建立第30-49页
    3.1 材料与方法第30-37页
        3.1.1 实验材料、试剂和器材第30-31页
        3.1.2 外植体消毒第31页
        3.1.3 愈伤组织的诱导与继代第31-32页
        3.1.4 愈伤组织的分化与植株再生第32-33页
        3.1.5 其他条件的改良第33页
        3.1.6 农杆菌菌株、载体及供试材料第33页
        3.1.7 遗传转化基本培养基及组成第33-35页
        3.1.8 预培养第35页
        3.1.9 农杆菌GV3101的活化第35页
        3.1.10 侵染第35页
        3.1.11 共培养第35-36页
        3.1.12 菌液洗脱与抗性筛选第36页
        3.1.13 分化与生根第36页
        3.1.14 转化条件设计方案第36-37页
    3.2 结果与分析第37-44页
        3.2.1 小花碱茅再生体系的优化第37-39页
        3.2.2 小花碱茅遗传转化体系的建立第39-44页
    3.3 讨论第44-48页
        3.3.1 小花碱茅组织培养体系的优化第44-45页
        3.3.2 农杆菌介导小花碱茅遗传转化的影响因素第45-48页
    3.4 小结第48-49页
第四章 PtHAK5编码基因的克隆及功能验证第49-66页
    4.1 材料与方法第49-56页
        4.1.1 材料第49-50页
        4.1.2 主要试剂与实验仪器第50页
        4.1.3 材料培养第50页
        4.1.4 总RNA的提取第50-51页
        4.1.5 PtHAK5基因 5’和 3’端片段克隆第51-52页
        4.1.6 蓝白斑筛选与阳性克隆鉴定第52页
        4.1.7 生物信息学分析第52页
        4.1.8 酵母菌株、表达载体及常用培养基第52-54页
        4.1.9 酵母表达载体的构建、转化和分析第54-56页
    4.2 结果与分析第56-63页
        4.2.1 小花碱茅幼苗总RNA质量第56页
        4.2.2 RT-PCR扩增第56-57页
        4.2.3 蓝白斑筛选与克隆第57-58页
        4.2.4 测序结果与分析第58-61页
        4.2.5 表达载体构建第61-63页
    4.3 讨论第63-65页
        4.3.1 PtHAK5编码小花碱茅高亲和性K~+转运蛋白第63-64页
        4.3.2 PtHAK5可能介导小花碱茅根系K~+吸收第64-65页
    4.4 小结第65-66页
第五章 结论第66-67页
参考文献第67-85页
在学期间的研究成果第85-86页
致谢第86-87页
图版第87-88页

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