| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 中英缩略语索引 | 第6-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 L-精氨酸产生菌分子育种研究进展 | 第11-19页 |
| 1.1 L-精氨酸及其产生菌选育策略研究进展 | 第11-14页 |
| 1.1.1 L-精氨酸理化性质 | 第11页 |
| 1.1.2 L-精氨酸的用途及其生产现状 | 第11页 |
| 1.1.3 L-精氨酸产生菌代谢工程改造策略 | 第11-14页 |
| 1.2 基因组尺度网络代谢模型 | 第14-16页 |
| 1.2.1 基因组尺度代谢网络模型的构建 | 第14-15页 |
| 1.2.2 基因组尺度网络模型在分子育种中的应用 | 第15-16页 |
| 1.2.3 基因组尺度代谢网络模型的应用实例 | 第16页 |
| 1.3 本论文研究目的及意义 | 第16-17页 |
| 1.4 本论文研究思路及内容 | 第17-19页 |
| 2 钝齿棒杆菌L-精氨酸合成竞争支路敲除及其对产L-精氨酸的影响 | 第19-37页 |
| 前言 | 第19-21页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 酶、试剂和实验仪器 | 第21页 |
| 2.1.3 培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.4 试剂配制方法 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 引物设计及合成 | 第22-23页 |
| 2.2.2 感受态细胞制备及转化过程 | 第23-24页 |
| 2.2.3 质粒DNA提取方法 | 第24-25页 |
| 2.2.4 DNA回收及纯化方法 | 第25页 |
| 2.2.5 钝齿棒杆菌proC和proB基因打靶载体的构建方法 | 第25-26页 |
| 2.2.6 同源重组过程和单、双交换重组子筛选方法 | 第26-27页 |
| 2.2.7 钝齿棒杆菌产L-精氨酸摇瓶发酵实验 | 第27-28页 |
| 2.2.8 菌体生长量的测定 | 第28页 |
| 2.2.9 L-精氨酸浓度的测定 | 第28页 |
| 2.2.10 发酵液残糖浓度的测定 | 第28-29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-35页 |
| 2.3.1 钝齿棒杆菌proB基因和proC基因敲除载体的构建 | 第29-31页 |
| 2.3.2 钝齿棒杆菌proB基因敲除株和proC基因敲除株的构建 | 第31-32页 |
| 2.3.3 钝齿棒杆菌proB基因缺失株摇瓶发酵实验 | 第32-33页 |
| 2.3.4 添加脯氨酸对proB基因缺失株摇瓶发酵实验 | 第33-34页 |
| 2.3.5 钝齿棒杆菌proC基因缺失株摇瓶发酵实验 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-37页 |
| 3 钝齿棒杆菌乙酸合成途径与支链氨基酸转运蛋白的敲除及其对产L-精氨酸的影响 | 第37-49页 |
| 前言 | 第37-39页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第39-40页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第39-40页 |
| 3.1.2 酶、试剂和实验仪器 | 第40页 |
| 3.1.3 培养基 | 第40页 |
| 3.1.4 试剂配制方法 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-41页 |
| 3.2.1 引物设计及合成 | 第40-41页 |
| 3.2.2 感受态细胞制备及转化过程 | 第41页 |
| 3.2.3 DNA回收及纯化 | 第41页 |
| 3.2.4 质粒DNA提取方法 | 第41页 |
| 3.2.5 钝齿棒杆菌pta、ack和cgl2310基因打靶载体构建 | 第41页 |
| 3.2.6 钝齿棒杆菌pta、ack和cgl2310基因缺失株的筛选 | 第41页 |
| 3.2.7 钝齿棒杆菌产L-精氨酸摇瓶发酵实验 | 第41页 |
| 3.2.8 菌体生长量的测定 | 第41页 |
| 3.2.9 L-精氨酸浓度的测定 | 第41页 |
| 3.2.10 发酵液残糖浓度的测定 | 第41页 |
| 3.3 实验结果 | 第41-47页 |
| 3.3.1 钝齿棒杆菌pta、ack和cgl2310基因打靶载体构建 | 第41-43页 |
| 3.3.2 钝齿棒杆菌pta、ack和cgl2310基因缺失株的构建 | 第43-45页 |
| 3.3.3 钝齿棒杆菌pta和ack基因敲除株的发酵实验 | 第45-47页 |
| 3.3.4 钝齿棒杆菌cgl2310基因缺失株的发酵实验 | 第47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-49页 |
| 4 钝齿棒杆菌proB、pta、cgl2310基因组合敲除及其对产L-精氨酸的影响 | 第49-54页 |
| 前言 | 第49-50页 |
| 4.1 实验材料与试剂 | 第50页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第50页 |
| 4.1.2 酶、试剂和实验仪器 | 第50页 |
| 4.1.3 培养基 | 第50页 |
| 4.1.4 试剂配制方法 | 第50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-51页 |
| 4.2.1 质粒DNA提取方法 | 第50-51页 |
| 4.2.2 感受态细胞制备及转化过程 | 第51页 |
| 4.2.3 同源重组和单、双交换重组子筛选方法 | 第51页 |
| 4.2.4 钝齿棒杆菌突变菌株L-精氨酸摇瓶发酵实验 | 第51页 |
| 4.2.5 L-精氨酸测定方法 | 第51页 |
| 4.2.6 菌体生长量测定方法 | 第51页 |
| 4.2.7 发酵液残糖量测定方法 | 第51页 |
| 4.3 实验结果 | 第51-53页 |
| 4.3.1 C. crenatum MT argB M4 ΔproB Δcgl2310的构建 | 第51-52页 |
| 4.3.2 C. crenatum MT argB M4 ΔproB Δcgl2310 Δpta的构建 | 第52页 |
| 4.3.3 钝齿棒杆菌突变菌株发酵实验 | 第52-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-54页 |
| 5 结论和展望 | 第54-56页 |
| 5.1 主要结论 | 第54-55页 |
| 5.2 课题展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 附录 | 第59-64页 |
| 附录 A1实验仪器 | 第59-60页 |
| 附录 A2试剂 | 第60-61页 |
| 附录 A3基因敲除模拟预测 | 第61-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 在读期间公开发表论文（著）及科研情况 | 第65页 |
