| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第11-27页 |
| 1.1 水稻矮缩病的发生和危害 | 第11页 |
| 1.2 水稻矮缩病的病害特征 | 第11页 |
| 1.3 RDV的寄主和传播介体 | 第11页 |
| 1.4 RDV的分类地位 | 第11-12页 |
| 1.5 病毒的形态结构 | 第12页 |
| 1.6 病毒的基因组结构 | 第12-14页 |
| 1.7 病毒编码的蛋白及其功能 | 第14-19页 |
| 1.7.1 结构蛋白 | 第14-16页 |
| 1.7.2 非结构蛋白 | 第16-19页 |
| 1.8 RDV的介体传毒特性 | 第19页 |
| 1.9 病毒在介体昆虫体内的侵染循回 | 第19-24页 |
| 1.9.1 非循回型病毒 | 第20-21页 |
| 1.9.2 循回型病毒 | 第21-24页 |
| 1.10 RDV的侵入和扩散 | 第24-25页 |
| 1.11 昆虫介体传毒的专化性 | 第25-26页 |
| 1.12 本研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-44页 |
| 2.1 材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 2.1.3 引物 | 第27-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-44页 |
| 2.2.1 酵母双杂交技术筛选黑尾叶蝉文库 | 第28-32页 |
| 2.2.1.1 酵母诱饵质粒转化NMY51 | 第28-29页 |
| 2.2.1.2 优化筛选条件 | 第29-30页 |
| 2.2.1.3 酵母双杂交技术筛选黑尾叶蝉文库 | 第30-31页 |
| 2.2.1.4 营养缺陷型培养基互作鉴定 | 第31页 |
| 2.2.1.5 β-半乳糖苷酶活性分析 | 第31-32页 |
| 2.2.1.6 酵母质粒的提取及转化大肠杆菌 | 第32页 |
| 2.2.1.7 阳性克隆的鉴定 | 第32页 |
| 2.2.1.8 插入片段序列分析 | 第32页 |
| 2.2.2 黑尾叶蝉actin基因的获取 | 第32-35页 |
| 2.2.2.1 TRIzol提取黑尾叶蝉总RNA | 第32-33页 |
| 2.2.2.2 RT-PCR方法扩增黑尾叶蝉肌肉型和胞质型actin | 第33-34页 |
| 2.2.2.3 目的片段连pMD18-T | 第34页 |
| 2.2.2.4 连接产物转化大肠杆菌DH5a | 第34-35页 |
| 2.2.2.5 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第35页 |
| 2.2.2.6 阳性克隆质粒的提取 | 第35页 |
| 2.2.3 酵母双杂交技术验证RDV Pns10与黑尾叶蝉actin的互作 | 第35-37页 |
| 2.2.3.1 酵母表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.2.3.2 阳性克隆的酶切鉴定 | 第36页 |
| 2.2.3.3 重组质粒共转化酵母感受态细胞 | 第36-37页 |
| 2.2.3.4 Pns10与黑尾叶蝉actin互作鉴定 | 第37页 |
| 2.2.3.5 Pns10与电光叶蝉actin互作鉴定 | 第37页 |
| 2.2.4 GST pull-down技术验证RDV Pns10与黑尾叶蝉和电光叶蝉actin的互作 | 第37-41页 |
| 2.2.4.1 GST标签载体的构建 | 第37-39页 |
| 2.2.4.2 His标签载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.2.4.3 目的蛋白的少量表达 | 第40页 |
| 2.2.4.4 目的蛋白的大量表达 | 第40页 |
| 2.2.4.5 GST pull-down技术验证RDV Pns10与叶蝉actin的互作 | 第40-41页 |
| 2.2.5 酵母双杂交技术鉴定RDV Pns10与电光叶蝉胞质型actin突变体的互作 | 第41-42页 |
| 2.2.5.1 电光叶蝉胞质型actin突变体的构建 | 第41-42页 |
| 2.2.5.2 酵母双杂交技术鉴定Pns10与电光叶蝉胞质型actin突变体的互作 | 第42页 |
| 2.2.6 免疫荧光观察Pns10小管在黑尾叶蝉和电光叶蝉消化道微绒毛中的分布 | 第42-44页 |
| 2.2.6.1 黑尾叶蝉和电光叶蝉的饲毒 | 第42页 |
| 2.2.6.2 黑尾叶蝉和电光叶蝉的解剖 | 第42-43页 |
| 2.2.6.3 免疫荧光标记 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-55页 |
| 3.1 酵母双杂交技术筛选黑尾叶蝉文库 | 第44-45页 |
| 3.1.1 优化3-AT浓度 | 第44页 |
| 3.1.2 黑尾叶蝉文库筛选结果 | 第44-45页 |
| 3.2 黑尾叶蝉肌肉型actin、黑尾叶蝉胞质型actin基因的获得 | 第45页 |
| 3.3 酵母双杂交技术验证RDV Pns10与黑尾叶蝉actin的互作 | 第45-46页 |
| 3.3.1 酵母表达质粒pPR3-N的构建 | 第45-46页 |
| 3.3.2 酵母双杂交技术验证Pns10与黑尾叶蝉actin的互作 | 第46页 |
| 3.4 酵母双杂交技术验证RDV Pns10与电光叶蝉actin的互作 | 第46-47页 |
| 3.5 GST pull-down技术验证RDV Pns10与叶蝉胞质型actin的互作 | 第47-50页 |
| 3.5.1 GST标签载体的构建 | 第47-48页 |
| 3.5.2 His标签载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.5.3 诱导可溶性蛋白 | 第49-50页 |
| 3.5.4 GST pull-down技术验证Pns10和胞质型actin的互作 | 第50页 |
| 3.6 酵母双杂交技术鉴定RDV Pns10与电光叶蝉胞质型actin突变体的互作 | 第50-52页 |
| 3.7 免疫荧光观察Pns10小管在黑尾叶蝉和电光叶蝉消化道微绒毛中的分布 | 第52-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 4.1 RDV Pns10与叶蝉actin的互作 | 第55-56页 |
| 4.2 介体传毒的专化性 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
