| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词语表 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-15页 |
| 参考文献 | 第13-15页 |
| 第一部分 ERβ通过促进肝细胞AGT1的表达从而抑制细胞的草酸合成 | 第15-32页 |
| 1.1 材料和方法 | 第15-28页 |
| 1.1.1 研究对象 | 第15页 |
| 1.1.2 试剂 | 第15-16页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第16-17页 |
| 1.1.4 沉默ERβ 基因shRNA重组表达载体的构建 | 第17-19页 |
| 1.1.5 过表达ERβ 基因的重组质粒构建 | 第19-21页 |
| 1.1.6 检测肝脏细胞ERβ 对草酸合成能力的影响 | 第21页 |
| 1.1.7 Q-PCR检测肝脏草酸代谢相关基因的表达情况 | 第21-22页 |
| 1.1.8 Western Blot检测肝细胞草酸代谢相关酶的蛋白水平表达情况 | 第22页 |
| 1.1.9 染色质免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP） | 第22-24页 |
| 1.1.10 荧光素酶报告基因载体的构建 | 第24-27页 |
| 1.1.11 荧光素酶报告基因实验 | 第27-28页 |
| 1.2 实验结果 | 第28-32页 |
| 1.2.1 ERβ 可以抑制HepG2细胞草酸合成 | 第28页 |
| 1.2.2 ERβ 通过上调AGT1从而抑制HepG2细胞草酸的合成 | 第28-29页 |
| 1.2.3 AGT1启动子序列中有ERβ 潜在结合位点 | 第29-30页 |
| 1.2.4 荧光素酶报告基因实验 | 第30-32页 |
| 第二部分 ERβ通过抑制NOX2减少草酸对肾小管上皮细胞的氧化应激损伤 | 第32-51页 |
| 2.1 材料和方法 | 第32-42页 |
| 2.1.1 研究对象 | 第32页 |
| 2.1.2 试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第33-34页 |
| 2.1.4 ERα 基因shRNA重组表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.1.5 分别沉默肾小管上皮细胞HK-2 及HK-8 的ERα 和ERβ | 第35-36页 |
| 2.1.6 二氢乙啶(Dihydroethidium, DHE)染色检测细胞内ROS的变化 | 第36页 |
| 2.1.7 细胞培养基中H2O2含量检测 | 第36页 |
| 2.1.8 LDH细胞毒性实验检测 | 第36-37页 |
| 2.1.9 Q-PCR检测肝脏草酸代谢相关基因的表达情况 | 第37-38页 |
| 2.1.10 Western Blot检测肾小管上皮细胞ERβ 及NOX2蛋白水平表达情况 | 第38页 |
| 2.1.11 沉默NOX2基因shRNA重组表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 2.1.12 ChIP | 第40页 |
| 2.1.13 荧光素酶报告基因载体的构建 | 第40-42页 |
| 2.1.14 荧光素酶报告基因实验 | 第42页 |
| 2.2 实验结果 | 第42-51页 |
| 2.2.1 ERβ 抑制草酸引起的肾小管上皮细胞氧化应激损伤 | 第42-45页 |
| 2.2.2 ERβ 抑制结石相关炎症基因的表达 | 第45-46页 |
| 2.2.3 沉默肾小管上皮细胞ERβ 增加NADPH氧化酶相关基因表达 | 第46-47页 |
| 2.2.4 沉默肾小管上皮细胞ERβ 通过上调NOX2表达导致草酸对细胞的氧化应激损伤增加 | 第47-49页 |
| 2.2.5 ERβ 调控NOX2表达的具体机制 | 第49-51页 |
| 第三部分 ERβ通过减少草酸排泄及减少肾脏氧化应激从而减少小鼠模型中草酸钙晶体的形成 | 第51-61页 |
| 3.1 材料和方法 | 第51-55页 |
| 3.1.1 研究对象 | 第51页 |
| 3.1.2 试剂 | 第51-52页 |
| 3.1.3 仪器 | 第52页 |
| 3.1.4 ERβ 基因敲除小鼠的繁殖与鉴定 | 第52-53页 |
| 3.1.5 小鼠草酸钙结石模型的构建 | 第53页 |
| 3.1.6 PHTPP处理小鼠 | 第53-54页 |
| 3.1.7 Apocynin处理小鼠 | 第54页 |
| 3.1.8 小鼠 24h尿液收集及相关指标的检测 | 第54页 |
| 3.1.9 Pizzolate法染色检测肾脏草酸钙晶体形成情况 | 第54页 |
| 3.1.10 Western blot检测小鼠肝脏AGT1蛋白的表达 | 第54-55页 |
| 3.1.11 DHE染色检测肾脏组织ROS含量 | 第55页 |
| 3.1.12 免疫组织化学染色 | 第55页 |
| 3.2 实验结果 | 第55-61页 |
| 3.2.1 ERβ 特异性拮抗剂PHTPP促进小鼠肾脏草酸钙（Calcium oxalate，CaOx）晶体形成 | 第55-56页 |
| 3.2.2 ERβKO小鼠肾脏CaOx晶体的形成增多 | 第56-57页 |
| 3.2.3 ERβKO小鼠尿液中草酸的排泄增加 | 第57页 |
| 3.2.4 ERβKO小鼠肝脏AGT1表达减少 | 第57-58页 |
| 3.2.5 ERβKO小鼠肾脏氧化应激水平增加 | 第58页 |
| 3.2.6 ERβKO小鼠尿液中H2O2含量增多 | 第58页 |
| 3.2.7 ERβKO小鼠肾脏内NOX2表达增多 | 第58-59页 |
| 3.2.8 NOX2抑制剂Apocynin可部分减少敲除ERβ 所导致的CaOx晶体增加 | 第59页 |
| 3.2.9 Apocynin可部分减少敲除ERβ 所导致的尿液中H2O2 | 第59-61页 |
| 讨论 | 第61-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 全文总结 | 第69-70页 |
| 综述 | 第70-77页 |
| 参考文献 | 第74-77页 |
| 攻读期间研究成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
