| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 文献综述 | 第10-28页 |
| 1 马立克氏病的研究进展 | 第10-11页 |
| 2 马立克氏病病毒基因组 | 第11-12页 |
| 2.1 病毒分类 | 第11页 |
| 2.2 MDV的形态学特征 | 第11-12页 |
| 2.3 MDV的分子特征 | 第12页 |
| 3 流行病学 | 第12页 |
| 4 临床症状 | 第12-13页 |
| 5 发病机制 | 第13-16页 |
| 5.1 早期溶细胞期 | 第13-15页 |
| 5.2 潜伏期 | 第15页 |
| 5.3 晚期溶细胞和免疫抑制期 | 第15页 |
| 5.4 增殖期 | 第15-16页 |
| 6 免疫应答机制 | 第16-19页 |
| 6.1 非特异性防御机制 | 第16-18页 |
| 6.2 适应性免疫应答 | 第18页 |
| 6.3 抗体的作用 | 第18页 |
| 6.4 细胞介导的免疫应答作用 | 第18-19页 |
| 7 抗马立克氏病疫苗 | 第19页 |
| 8 生物安全 | 第19-20页 |
| 9 马立克氏病病毒致肿瘤基因pp38的研究 | 第20-21页 |
| 10 Toll样受体在免疫应答中的作用 | 第21-26页 |
| 10.1 TLRs的简介 | 第21-25页 |
| 10.2 TLRs信号通路及相关细胞因子 | 第25-26页 |
| 11 研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 研究内容一 马立克氏病pp38蛋白真核表达载体的构建 | 第28-40页 |
| 1 材料 | 第28-30页 |
| 1.1 毒株、菌种与细胞 | 第28页 |
| 1.2 载体与主要试剂 | 第28-29页 |
| 1.3 培养基与试剂 | 第29-30页 |
| 1.4 主要仪器 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-36页 |
| 2.1 CVI988株与RB1B株基因组总DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2 引物设计 | 第31页 |
| 2.3 PCR扩增CV1988株与RB1B株pp38基因 | 第31-32页 |
| 2.4 PCR产物的回收纯化 | 第32页 |
| 2.5 酶切 | 第32-33页 |
| 2.6 酶切回收纯化 | 第33页 |
| 2.7 连接 | 第33页 |
| 2.8 E.coli DH5α感受态的制备 | 第33-34页 |
| 2.9 转化 | 第34页 |
| 2.10 阳性克隆筛选鉴定 | 第34-35页 |
| 2.11 阳性重组质粒转染CEF细胞 | 第35页 |
| 2.12 间接免疫荧光试验 | 第35页 |
| 2.13 Western blot鉴定重组质粒的表达 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-38页 |
| 3.1 MDV pp38基因的PCR扩增结果 | 第36页 |
| 3.2 pp38重组质粒的筛选和酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3 重组质粒pCMV-pp38-Flag中pp38基因测序结果 | 第37页 |
| 3.4 转染细胞中pp38表达的检测 | 第37-38页 |
| 3.5 Western blot中重组质粒的表达 | 第38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| 研究内容二 疫苗株与强毒株pp38蛋白对Toll样受体信号通路的影响 | 第40-61页 |
| 1 材料 | 第40页 |
| 1.1 主要试剂 | 第40页 |
| 1.2 主要仪器 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-44页 |
| 2.1 重组质粒中量提取 | 第40-41页 |
| 2.2 重组质粒转染CEF细胞 | 第41页 |
| 2.3 poly(I:C)刺激 | 第41-42页 |
| 2.4 RNA提取 | 第42页 |
| 2.5 反转录 | 第42-43页 |
| 2.6 Real-time PCR | 第43-44页 |
| 2.7 统计分析 | 第44页 |
| 3 结果 | 第44-56页 |
| 3.1 MyD88非依赖途径相关基因表达情况 | 第44-48页 |
| 3.1.1 pp38对TLR3表达的抑制作用 | 第44-45页 |
| 3.1.2 TRIF途径的相对表达量 | 第45-46页 |
| 3.1.3 IRIF3的相对表达量 | 第46-47页 |
| 3.1.4 IKKα NF-κB的相对表达量 | 第47-48页 |
| 3.2 MyD88依赖途径相关因子的表达情况 | 第48-49页 |
| 3.3 其他Toll样受体的表达情况 | 第49-52页 |
| 3.3.1 TLR2的相对表达量 | 第49-50页 |
| 3.3.2 TLR7的相对表达量 | 第50-51页 |
| 3.3.3 TLR15的相对表达量 | 第51-52页 |
| 3.3.4 TLR4、TLR21的相对表达量 | 第52页 |
| 3.4 其他细胞因子及免疫活性因子的检测 | 第52-56页 |
| 3.4.1 IL-6、IL-12及TNF-α的表达情况 | 第52-54页 |
| 3.4.2 MDA5通路相关因子 | 第54-55页 |
| 3.4.3 PKR的表达情况 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-61页 |
| 4.1 pp38对MyD88非依赖途径的抑制作用 | 第56-57页 |
| 4.2 pp38对MyD88依赖途径的影响 | 第57-59页 |
| 4.3 病毒致病力对TLRs表达量的影响 | 第59页 |
| 4.4 pp38对其他一些细胞因子的影响 | 第59-61页 |
| 全文小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
