| 论文创新点 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 缩写符号 | 第13-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-49页 |
| 1.1 拟南芥早期胚胎与胚乳发育 | 第19-32页 |
| 1.1.1 早期胚胎发育过程 | 第19-26页 |
| 1.1.2 早期胚乳发育过程 | 第26-29页 |
| 1.1.3 线粒体与早期胚胎和胚乳发育 | 第29-32页 |
| 1.2 线粒体蛋白运输机制 | 第32-41页 |
| 1.2.1 TOM复合体与跨外膜转运 | 第34-35页 |
| 1.2.2 TIM23转位酶复合体与前导肽途径 | 第35-37页 |
| 1.2.3 TIM22转位酶复合体与载体蛋白途径 | 第37-38页 |
| 1.2.4 植物线粒体蛋白运输机制 | 第38-41页 |
| 1.3 TIM9和TIM10的研究进展 | 第41-47页 |
| 1.3.1 TIM9：10复合体的运输机制 | 第42-43页 |
| 1.3.2 TIM9和TIM10蛋白的结构特征 | 第43-46页 |
| 1.3.3 TIM9和TIM10蛋白的生物学功能 | 第46页 |
| 1.3.4 植物线粒体中的TIM9和TIM10 | 第46-47页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第47-49页 |
| 第二章 拟南芥AtTIM9和AtTIM10基因相关突变体的鉴定与表型分析 | 第49-73页 |
| 2.1 前言 | 第49-50页 |
| 2.2 实验材料及方法 | 第50-57页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 2.2.2 生物试剂及培养基 | 第51-52页 |
| 2.2.3 仪器设备及分析软件 | 第52-53页 |
| 2.2.4 突变体的鉴定与表型观察 | 第53-54页 |
| 2.2.5 角果的表型观察与统计分析 | 第54页 |
| 2.2.6 突变体抗性分离比的统计 | 第54-55页 |
| 2.2.7 突变体回复实验 | 第55-56页 |
| 2.2.8 早期胚胎和胚乳透明观察与统计 | 第56-57页 |
| 2.2.9 双突变植株的获得 | 第57页 |
| 2.3 实验结果及分析 | 第57-71页 |
| 2.3.1 突变体tim9-1,tim9-2和tim10均为杂合突变体 | 第57-58页 |
| 2.3.2 突变体tim9-1,tim9-2和tim10的T-DNA插入位点 | 第58-60页 |
| 2.3.3 突变体tim9-1,tim9-2和tim10的表型分析 | 第60-61页 |
| 2.3.4 突变体tim9-1,tim9-2和tim10的雌雄配子体育性分析 | 第61-63页 |
| 2.3.5 互补实验证明突变体败育表型均能被完全回复 | 第63-65页 |
| 2.3.6 突变体tim9-1,tim9-2和tim10胚胎发育的表型分析 | 第65-68页 |
| 2.3.7 突变体tim9-1,tim9-2和tim10胚乳发育的表型分析 | 第68-70页 |
| 2.3.8 双突变株系tim9-1/+tim10/+的获得与表型分析 | 第70-71页 |
| 2.4 讨论 | 第71-73页 |
| 第三章 拟南芥AtTIM9和AtTIM10基因的表达分析 | 第73-88页 |
| 3.1 前言 | 第73-74页 |
| 3.2 实验材料及方法 | 第74-80页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第74-75页 |
| 3.2.2 生物试剂及培养基 | 第75-76页 |
| 3.2.3 仪器设备及分析软件 | 第76页 |
| 3.2.4 启动子与GUS融合表达分析 | 第76-77页 |
| 3.2.5 定量PCR表达分析 | 第77-78页 |
| 3.2.6 原位杂交 | 第78-80页 |
| 3.3 实验结果及分析 | 第80-86页 |
| 3.3.1 AtTIM9和AtTIM10基因在生物信息数据库的表达分析 | 第80-81页 |
| 3.3.2 AtTIM9：：GUS和AtTIM10：：GUS组织表达分析 | 第81-83页 |
| 3.3.3 AtTIM9和AtTIM10基因qRT-PCR分析 | 第83-84页 |
| 3.3.4 AtTIM9和AtTIM10基因原位杂交分析 | 第84-86页 |
| 3.4 讨论 | 第86-88页 |
| 第四章 拟南芥AtTIM9和AtTIM10蛋白复合体的分析 | 第88-110页 |
| 4.1 前言 | 第88-89页 |
| 4.2 实验材料及方法 | 第89-96页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第89-90页 |
| 4.2.2 生物试剂及培养基 | 第90-91页 |
| 4.2.3 仪器设备及分析软件 | 第91页 |
| 4.2.4 蛋白同源分析 | 第91-92页 |
| 4.2.5 蛋白亚细胞定位分析 | 第92-93页 |
| 4.2.6 酵母双杂交技术 | 第93-94页 |
| 4.2.7 蛋白免疫共沉淀(Co-IP)技术 | 第94-95页 |
| 4.2.8 双分子荧光互补(BiFC)技术 | 第95-96页 |
| 4.3 实验结果及分析 | 第96-107页 |
| 4.3.1 AtTIM9和AtTIM10蛋白氨基酸序列比对 | 第96-97页 |
| 4.3.2 AtTIM9和AtTIM10蛋白二级结构同源建模 | 第97-98页 |
| 4.3.3 AtTIM9和AtTIM10亚细胞定位转基因植株鉴定 | 第98-101页 |
| 4.3.4 AtTIM9和AtTIM10亚细胞定位荧光观察 | 第101-102页 |
| 4.3.5 AtTIM9和AtTIM10蛋白间的亚细胞共定位 | 第102-103页 |
| 4.3.6 酵母双杂交验证蛋白相互作用 | 第103-105页 |
| 4.3.7 Co-IP验证蛋白相互作用 | 第105-106页 |
| 4.3.8 BiFC验证蛋白相互作用 | 第106-107页 |
| 4.4 讨论 | 第107-110页 |
| 4.4.1 在真核物种中TIM9与TIM10蛋白结构的高度保守性 | 第107-108页 |
| 4.4.2 通过融合荧光蛋白进行目标蛋白研究的利弊 | 第108页 |
| 4.4.3 不同的植物转化体系及其优缺点 | 第108-110页 |
| 第五章 拟南芥AtTIM9和AtTIM10生物学功能分析 | 第110-122页 |
| 5.1 前言 | 第110-112页 |
| 5.2 实验材料及方法 | 第112-115页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第112页 |
| 5.2.2 仪器设备及分析软件 | 第112-113页 |
| 5.2.3 早期活体胚胎分离与染色 | 第113-114页 |
| 5.2.4 早期胚胎细胞中线粒体超微结构的观察 | 第114页 |
| 5.2.5 免疫荧光检测早期胚体细胞线粒体内细胞色素c(Cyt c)蛋白 | 第114页 |
| 5.2.6 TUNEL法检测细胞程序性死亡 | 第114-115页 |
| 5.3 实验结果及分析 | 第115-119页 |
| 5.3.1 突变体tim9-1和tim10胚体细胞活性丧失 | 第115-116页 |
| 5.3.2 突变体tim9-1和tim10胚体细胞内线粒体活性丧失 | 第116页 |
| 5.3.3 突变体tim9-1和tim10胚体及胚乳细胞内线粒体结构异常 | 第116-117页 |
| 5.3.4 突变体tim9-1和tim10胚体细胞内线粒体膜通透性异常增加 | 第117页 |
| 5.3.5 突变体tim9-1和tim10胚体中细胞色素c由线粒体释放至细胞质 | 第117-118页 |
| 5.3.6 突变体tim9-1和tim10胚体细胞及胚乳发生细胞程序性死亡 | 第118页 |
| 5.3.7 突变体tim9-1和tim10胚体细胞ROS含量异常增加 | 第118-119页 |
| 5.4 讨论 | 第119-122页 |
| 5.4.1 胚胎活体分离技术是一个直接而有效的研究纯合致死胚胎的方法 | 第119-120页 |
| 5.4.2 突变体tim9-1和tim10中线粒体异常只发生在胚体和胚乳细胞而未发生在胚柄细胞 | 第120-122页 |
| 第六章 拟南芥胚胎发育相关突变体的筛选及鉴定 | 第122-136页 |
| 6.1 前言 | 第122-123页 |
| 6.2 实验材料及方法 | 第123-128页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第123页 |
| 6.2.2 生物试剂及植物营养液 | 第123-124页 |
| 6.2.3 仪器设备及分析软件 | 第124页 |
| 6.2.4 突变体的筛选 | 第124-125页 |
| 6.2.5 突变体T-DNA插入位点的鉴定 | 第125-128页 |
| 6.3 实验结果及分析 | 第128-134页 |
| 6.3.1 胚胎发育相关突变体植株筛选 | 第128-129页 |
| 6.3.2 突变体植株胚胎表型分析 | 第129-130页 |
| 6.3.3 PCR分析T-DNA插入片段的左边界 | 第130-131页 |
| 6.3.4 TAIL-PCR检测T-DNA的插入位点 | 第131-134页 |
| 6.4 讨论 | 第134-136页 |
| 6.4.1 T-DNA突变体中插入载体边界序列异常的分析 | 第134-135页 |
| 6.4.2 TAIL-PCR条件的优化 | 第135-136页 |
| 第七章 总讨论 | 第136-138页 |
| 图版及图版说明 | 第138-165页 |
| 参考文献 | 第165-193页 |
| 在读期间发表及待发表论文 | 第193-194页 |
| 致谢 | 第194页 |
