中文摘要 | 第5-7页 |
ABSTRACT | 第7-8页 |
目录 | 第9-13页 |
英文缩写词表 | 第13-15页 |
提要 | 第15-16页 |
前言 | 第16-19页 |
文献综述 | 第19-28页 |
1. 卵巢癌流行病学 | 第19页 |
2. 卵巢癌的治疗现状 | 第19-20页 |
3. 肿瘤内皮细胞标志物(TEMs)研究现状 | 第20-22页 |
4. Fc段融合蛋白研究现状 | 第22-28页 |
材料与方法 | 第28-46页 |
1 主要材料 | 第28-32页 |
1.1 实验对象 | 第28页 |
1.2 菌株和质粒 | 第28页 |
1.3 主要试剂及试剂盒 | 第28-30页 |
1.4 其他主要试剂的配置 | 第30-31页 |
1.5 主要仪器 | 第31-32页 |
2 主要方法 | 第32-46页 |
2.1 载体 | 第32-34页 |
2.1.1 TA克隆载体 | 第32-33页 |
2.1.2 真核表达质粒载体 | 第33-34页 |
2.2 单链抗体scFv78结构改造及表达质粒设计 | 第34-37页 |
2.2.1 表达质粒构建模式图如下 | 第34-35页 |
2.2.2 引物设计 | 第35-36页 |
2.2.3 PCR特异性扩增产物 | 第36页 |
2.2.4 PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳 | 第36页 |
2.2.5 电泳片段胶回收 | 第36-37页 |
2.3 蛋白的纯化 | 第37-40页 |
2.3.1 大肠杆菌的转化 | 第37页 |
2.3.2 小量提取质粒 | 第37-38页 |
2.3.3 质粒大量提取 | 第38-39页 |
2.3.4 转化 | 第39-40页 |
2.3.5 小量蛋白纯化 | 第40页 |
2.4 活细胞酶联免疫吸附试验 | 第40-41页 |
2.5 血清稳定性检测 | 第41页 |
2.6 温度稳定性分析 | 第41页 |
2.7 RNA分离和QRT-PCR | 第41-42页 |
2.8 用VIVOTAG-S 750标记78FC | 第42页 |
2.9 共聚焦显微镜观察细胞对抗体78FC的内吞实验 | 第42页 |
2.10 放射性标记以及免疫反应性分析 | 第42-43页 |
2.11 血液药物代谢动力学和生物分布研究 | 第43页 |
2.12 表达鼠TEM1的TC1模型 | 第43-44页 |
2.13 表达人TEM1的肿瘤血管模型 | 第44页 |
2.14 体内2D生物发光成像(BLI)和散射光成像断层扫描 | 第44页 |
2.15 体内2D NIR荧光成像和荧光成像断层扫描 | 第44-45页 |
2.16 体内双模态成像 | 第45页 |
2.17 成管实验 | 第45页 |
2.18 统计学分析 | 第45-46页 |
实验结果 | 第46-66页 |
一、 抗肿瘤血管标记物蛋白TEM1特异性单链抗体scFv78及其多价抗体衍生物的表达和纯化及特征分析 | 第46-51页 |
二、 体内外肿瘤血管模型的建立及特异性抗体78FC的功能分析 | 第51-54页 |
三、以TEMl为IE点成像方法的建立 | 第54-62页 |
四、以TEMl为紀点治疗方法的建立 | 第62-66页 |
讨论 | 第66-72页 |
结论 | 第72-74页 |
参考文献 | 第74-86页 |
致谢 | 第86-88页 |
作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第88-89页 |