| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 缩略词表 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-33页 |
| 1 前言 | 第17页 |
| 2 肌肉生长发育的研究进展 | 第17-22页 |
| 2.1 肌肉生长发育的过程 | 第17-18页 |
| 2.2 肌肉干细胞 | 第18-19页 |
| 2.3 肌肉损伤修复与再生 | 第19-20页 |
| 2.4 肌肉损伤修复的调控 | 第20-22页 |
| 3 脂肪生长发育研究进展 | 第22-26页 |
| 3.1 脂肪的分类 | 第22-23页 |
| 3.2 脂肪干细胞的来源 | 第23页 |
| 3.3 脂肪的生长与发育调控 | 第23-26页 |
| 4 mTOR信号通路研究进展 | 第26-29页 |
| 4.1 mTOR信号通路及其功能 | 第26-27页 |
| 4.2 mTOR对肌肉发育和再生的调控 | 第27-28页 |
| 4.3 mTOR对脂肪生长发育的调控 | 第28-29页 |
| 5 Cre-LoxP系统及其构建基因敲除动物的研究进展 | 第29-31页 |
| 5.1 Cre-LoxP系统的研究进展 | 第29-30页 |
| 5.2 骨骼肌特异性敲除小鼠模型的研究进展 | 第30-31页 |
| 5.3 脂肪组织特异性敲除小鼠模型的研究进展 | 第31页 |
| 6 研究目的与意义 | 第31-33页 |
| 第二章 利用骨骼肌卫星细胞特异性敲除小鼠研究mTOR在肌肉再生和肌肉干细胞中的功能 | 第33-57页 |
| 1 试验材料 | 第33-34页 |
| 1.1 试验动物 | 第33页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第33-34页 |
| 2 试验方法 | 第34-42页 |
| 2.1 苏木素-伊红染色（Hematoxylin and eosin staining，H&E staining） | 第34-35页 |
| 2.1.1 试剂配制 | 第34页 |
| 2.1.2 染色步骤 | 第34-35页 |
| 2.2 骨骼肌卫星细胞的分离培养 | 第35-36页 |
| 2.2.1 试剂配制 | 第35页 |
| 2.2.2 骨骼肌卫星细胞分离培养 | 第35-36页 |
| 2.2.3 骨骼肌卫星细胞的分化 | 第36页 |
| 2.3 小鼠基因分型 | 第36-37页 |
| 2.3.1 试剂配制 | 第36页 |
| 2.3.2 试验步骤 | 第36-37页 |
| 2.4 蛋白质提取与Western blot | 第37-39页 |
| 2.4.1 试剂配制 | 第37-39页 |
| 2.4.2 试验步骤 | 第39页 |
| 2.5 mRNA提取与定量PCR | 第39-40页 |
| 2.6 肌肉损伤和再生检测 | 第40页 |
| 2.7 Tamoxifen诱导基因敲除 | 第40页 |
| 2.8 Evansblue染色 | 第40页 |
| 2.9 免疫荧光染色 | 第40-41页 |
| 2.9.1 试剂配制 | 第40-41页 |
| 2.9.2 染色步骤 | 第41页 |
| 2.10 单根肌纤维分离培养 | 第41-42页 |
| 2.10.1 试剂配制 | 第41页 |
| 2.10.2 单根肌纤维分离培养 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-53页 |
| 3.1 骨骼肌卫星细胞特异性mTOR敲除小鼠模型的构建 | 第42页 |
| 3.2 骨骼肌卫星细胞特异性mTOR敲除小鼠模型的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3 敲除mTOR对骨骼肌再生的影响 | 第43-45页 |
| 3.4 药物阻断mTOR信号通路对肌肉损伤修复的影响 | 第45-47页 |
| 3.5 敲除mTOR对单根肌纤维上骨骼肌卫星细胞的数目的影响 | 第47-49页 |
| 3.6 mTOR敲除对卫星细胞定向的影响 | 第49-50页 |
| 3.7 mTOR敲除对细胞分化的影响 | 第50-51页 |
| 3.8 mTOR敲除对成肌因子表达的影响 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| 4.1 骨骼肌特异性mTOR敲除小鼠模型的建立 | 第53页 |
| 4.2 敲除mTOR对肌肉再生的影响 | 第53-54页 |
| 4.3 mTOR不影响骨骼肌卫星细胞的定向 | 第54页 |
| 4.4 敲除mTOR抑制骨骼肌卫星细胞的增殖和分化 | 第54-56页 |
| 4.5 mTOR调控骨骼肌卫星细胞行为的作用机制 | 第56-57页 |
| 第三章 mTOR在心肌发育中的功能 | 第57-70页 |
| 1 试验动物 | 第57页 |
| 2 试验方法 | 第57-58页 |
| 2.1 马松三色法染色（Masson's Trichrome Staining） | 第57-58页 |
| 2.1.1 试剂配制 | 第57页 |
| 2.1.2 染色步骤 | 第57-58页 |
| 3 试验结果 | 第58-67页 |
| 3.1 Mck-Cre介导的mTOR敲除小鼠的构建及鉴定 | 第58-59页 |
| 3.2 mTOR敲除小鼠的表型特征 | 第59-60页 |
| 3.3 心肌mTOR缺失引发扩张性心肌病 | 第60-63页 |
| 3.4 心肌mTOR缺失对心肌细胞的影响 | 第63-64页 |
| 3.5 心肌细胞死亡导致心脏纤维化 | 第64-66页 |
| 3.6 心肌mTOR对心脏能量代谢的影响 | 第66-67页 |
| 3.7 mTOR缺失对下游信号通路的影响 | 第67页 |
| 4 讨论 | 第67-70页 |
| 第四章 mTOR在脂肪发育中的功能 | 第70-88页 |
| 1 试验材料 | 第70页 |
| 1.1 试验动物 | 第70页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第70页 |
| 2 试验方法 | 第70-73页 |
| 2.1 葡萄糖耐受性检测 | 第70-71页 |
| 2.2 胰岛素敏感性检测 | 第71页 |
| 2.3 脂肪组织血管基质部分细胞的分离培养 | 第71-72页 |
| 2.3.1 试剂配制 | 第71-72页 |
| 2.3.2 脂肪组织血管基质部分细胞的分离培养 | 第72页 |
| 2.4 油红O染色 | 第72-73页 |
| 2.4.1 试剂配制 | 第72-73页 |
| 2.4.2 试验步骤 | 第73页 |
| 2.5 代谢笼试验 | 第73页 |
| 3 结果与分析 | 第73-84页 |
| 3.1 脂肪组织特异性mTOR敲除小鼠模型的构建 | 第73-74页 |
| 3.2 脂肪组织特异性mTOR敲除小鼠的鉴定 | 第74-75页 |
| 3.3 敲除mTOR对脂肪沉积的影响 | 第75-77页 |
| 3.4 mTOR敲除对脂肪细胞的影响 | 第77页 |
| 3.5 mTOR对脂肪形成相关基因表达的调控 | 第77-79页 |
| 3.6 SVF细胞的成脂肪分化需要mTOR的参与 | 第79-80页 |
| 3.7 mTOR对低温下小鼠体温维持的影响 | 第80-81页 |
| 3.8 mTOR敲除对小鼠的能量代谢的调控 | 第81-82页 |
| 3.9 小鼠mTOR敲除对高能饲料诱导下脂肪沉积的影响 | 第82-83页 |
| 3.10 mTOR敲除小鼠的胰岛素敏感性分析 | 第83-84页 |
| 4 讨论 | 第84-88页 |
| 4.1 脂肪特异性mTOR敲除小鼠模型的构建 | 第84-85页 |
| 4.2 mTOR对脂肪沉积的调控 | 第85-86页 |
| 4.3 成脂肪细胞的分化需要mTOR的参与 | 第86页 |
| 4.4 mTOR敲除之后增加了脂肪的能量消耗 | 第86-87页 |
| 4.5 小鼠敲除mTOR之后可以抵制高能饲料诱导的肥胖 | 第87-88页 |
| 第五章 结语 | 第88-90页 |
| 1 主要结论 | 第88页 |
| 2 本研究的创新点 | 第88-89页 |
| 3 值得一步研究解决的问题 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 博士在读期间发表论文 | 第107-109页 |
