摘要 | 第12-14页 |
英文摘要 | 第14-16页 |
第一章 文献综述 | 第17-29页 |
1 直链淀粉研究进展 | 第17-20页 |
1.1 直链淀粉含量响与稻米蒸煮食味品质的关系 | 第17-18页 |
1.2 直链淀粉的合成 | 第18-19页 |
1.3 直链淀粉遗传因素的研究 | 第19-20页 |
2 淀粉合成酶研究进展 | 第20-23页 |
2.1 ADP-葡萄糖焦磷酸化酶 | 第21-22页 |
2.2 淀粉合成酶 | 第22-23页 |
2.3 淀粉分支酶 | 第23页 |
3 转录因子研究进展 | 第23-27页 |
3.1 转录因子的结构 | 第23-25页 |
3.1.1 DNA结合区 | 第24页 |
3.1.2 转录调控区 | 第24页 |
3.1.3 寡聚化区 | 第24页 |
3.1.4 核定位信号区 | 第24-25页 |
3.2 转录因子分类 | 第25页 |
3.3 转录因子功能 | 第25-27页 |
3.3.1 转录因子对胚乳的发育和贮藏物质的积累 | 第25-26页 |
3.3.2 转录因子对淀粉生物合成基因的调节 | 第26页 |
3.3.3 水稻淀粉调节因子研究进展 | 第26-27页 |
4 研究的主要目的与意义 | 第27-28页 |
5 本研究技术路线 | 第28-29页 |
第二章 淀粉合成关键酶基因及Os RSR1基因表达特性分析 | 第29-45页 |
1 材料与方法 | 第29-34页 |
1.1 供试材料 | 第29-30页 |
1.2 试验方法 | 第30页 |
1.3 籽粒直链淀粉含量测定方法 | 第30页 |
1.4 淀粉合成关键酶活性测定方法 | 第30-31页 |
1.4.1 ADPG焦磷酸化酶和SSS可溶性淀粉合成酶活性测定方法 | 第30-31页 |
1.4.2 淀粉分支酶活性测定方法 | 第31页 |
1.5 淀粉合成关键酶基因及Os RSR1基因表达量测定 | 第31-34页 |
1.5.1 试剂 | 第31页 |
1.5.2 基因序列获取 | 第31页 |
1.5.3 荧光定量引物设计 | 第31-32页 |
1.5.4 总RNA的提取 | 第32-33页 |
1.5.5 c DNA第一条链合成 | 第33页 |
1.5.6 荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR ) | 第33-34页 |
1.5.7 RT-q PCR计算 | 第34页 |
1.6 数据分析 | 第34页 |
2 结果与分析 | 第34-43页 |
2.1 不同灌浆时期籽粒RNA提取 | 第34-35页 |
2.2 不同灌浆时期籽粒直链淀粉含量比较 | 第35页 |
2.3 不同灌浆时期籽粒淀粉合成关键酶活性比较 | 第35-37页 |
2.4 不同灌浆时期籽粒淀粉合成关键酶基因表达量比较 | 第37-40页 |
2.4.1 不同灌浆时期籽粒Os AGP基因表达量比较 | 第37-38页 |
2.4.2 不同灌浆时期籽淀粉合成酶基因表达量比较 | 第38-39页 |
2.4.3 不同灌浆时期籽粒OsSBE3基因表达量比较 | 第39-40页 |
2.5 不同灌浆时期籽粒Os RSR1因子表达量比较 | 第40-41页 |
2.6 籽粒转录因子和淀粉合成相关基因表达量与酶活性及淀粉含量关系 | 第41-43页 |
3 讨论 | 第43-45页 |
3.1 关于籽粒淀粉合成相关酶活性及其基因表达与直链淀粉含量关系 | 第43-44页 |
3.2 关于籽粒Os RSR1因子与籽粒淀粉合成相关酶基因表达关系 | 第44-45页 |
第三章 水稻Os RSR1因子序列比较分析 | 第45-60页 |
1 材料与方法 | 第45-50页 |
1.1 试验材料 | 第45-46页 |
1.1.1 供试材料 | 第45-46页 |
1.1.2 菌种与载体 | 第46页 |
1.1.3 主要试剂 | 第46页 |
1.1.4 PCR扩增Os RSR1基因全c DNA | 第46页 |
1.1.5 培养基 | 第46页 |
1.2 试验方法 | 第46-50页 |
1.2.1 水稻总RNA的提取 | 第46-47页 |
1.2.2 反转录c DNA链的合成 | 第47页 |
1.2.3 c DNA全长基因的获得 | 第47-48页 |
1.2.4 DNA片段的回收 | 第48页 |
1.2.5 DNA片段与克隆载体的连接 | 第48-49页 |
1.2.6 DNA片段的转化 | 第49页 |
1.2.7 质粒DNA提取(小量法) | 第49-50页 |
1.2.8 质粒酶切验证 | 第50页 |
1.2.9 c DNA序列分析 | 第50页 |
2 结果与分析 | 第50-58页 |
2.1 总RNA提取与第一链c DNA合成 | 第50-51页 |
2.2 籽粒Os RSR1基因克隆及鉴定 | 第51-52页 |
2.3 籽粒Os RSR1因子核苷酸及氨基酸序列 | 第52-55页 |
2.4 籽粒Os RSR1基因全长c DNA序列比对 | 第55-56页 |
2.5 水稻Os RSR1基因序列结构分析 | 第56-58页 |
3 讨论 | 第58-60页 |
第四章 Os RSR1基因沉默对淀粉合成关键酶基因表达及产量和品质性状的影响 | 第60-85页 |
1 试验材料与方法 | 第61-71页 |
1.1 试验材料 | 第61-62页 |
1.1.1 植物材料 | 第61页 |
1.1.2 菌株 | 第61页 |
1.1.3 质粒载体 | 第61页 |
1.1.4 试剂盒 | 第61-62页 |
1.1.5 试剂 | 第62页 |
1.1.6 培养基 | 第62页 |
1.1.7 PCR引物 | 第62页 |
1.2 试验方法 | 第62-71页 |
1.2.1 Os RSR1-RNAi干扰载体构建 | 第62-67页 |
1.2.2 水稻遗传转化及转基因植株分子检测 | 第67-70页 |
1.2.3 转基因株系性状测定 | 第70-71页 |
2 结果与分析 | 第71-81页 |
2.1 Os RSR1-RNAi干扰载体构建 | 第71-74页 |
2.1.1 Os RSR1-RNAi干扰载体的构建流程 | 第71页 |
2.1.2 RT-PCR法扩增水稻Os RSR1基因干扰区段 | 第71-74页 |
2.2 p BWA(V)HS-Os RSR1质粒转化农杆菌 | 第74-76页 |
2.3 Os RSR1 RNAi转基因水稻植株的获得 | 第76页 |
2.4 转基因植株T0代PCR检测 | 第76-77页 |
2.5 转基因植株T1代抗性检测 | 第77-78页 |
2.5.1 抗性植株筛选 | 第77-78页 |
2.5.2 转基因植株T1代PCR检测 | 第78页 |
2.6 Os RSR1-RNAi对淀粉合成相关酶基因表达量的影响 | 第78-79页 |
2.7 转基因株系与野生型对照淀粉合成关键酶基因表达量比较 | 第79-80页 |
2.8 Os RSR1 RNAi对产量和品质性状的影响 | 第80-81页 |
3 讨论 | 第81-85页 |
3.1 关于籽粒Os RSR1转录因子载体快速构建 | 第81-82页 |
3.2 农杆菌介导的Os RSR1-RNAi干扰载体遗传转化 | 第82-83页 |
3.3 Os RSR1基因沉默对淀粉合成关键酶基因表达及产量和品质性状的影响 | 第83-85页 |
综合讨论 | 第85-88页 |
1 关于籽粒 Os RSR1 转录因子序列变异及表达调控机理 | 第85-86页 |
2 关于籽粒淀粉合成相关酶基因和 Os RSR1 转录因子表达调控以及直链淀粉含量超亲变异 | 第86-88页 |
全文结论 | 第88-89页 |
致谢 | 第89-90页 |
参考文献 | 第90-99页 |
附录 | 第99-104页 |
缩略词表 | 第104-105页 |
攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第105页 |