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水稻转录因子OsRSR1遗传变异及调控机理研究

摘要第12-14页
英文摘要第14-16页
第一章 文献综述第17-29页
    1 直链淀粉研究进展第17-20页
        1.1 直链淀粉含量响与稻米蒸煮食味品质的关系第17-18页
        1.2 直链淀粉的合成第18-19页
        1.3 直链淀粉遗传因素的研究第19-20页
    2 淀粉合成酶研究进展第20-23页
        2.1 ADP-葡萄糖焦磷酸化酶第21-22页
        2.2 淀粉合成酶第22-23页
        2.3 淀粉分支酶第23页
    3 转录因子研究进展第23-27页
        3.1 转录因子的结构第23-25页
            3.1.1 DNA结合区第24页
            3.1.2 转录调控区第24页
            3.1.3 寡聚化区第24页
            3.1.4 核定位信号区第24-25页
        3.2 转录因子分类第25页
        3.3 转录因子功能第25-27页
            3.3.1 转录因子对胚乳的发育和贮藏物质的积累第25-26页
            3.3.2 转录因子对淀粉生物合成基因的调节第26页
            3.3.3 水稻淀粉调节因子研究进展第26-27页
    4 研究的主要目的与意义第27-28页
    5 本研究技术路线第28-29页
第二章 淀粉合成关键酶基因及Os RSR1基因表达特性分析第29-45页
    1 材料与方法第29-34页
        1.1 供试材料第29-30页
        1.2 试验方法第30页
        1.3 籽粒直链淀粉含量测定方法第30页
        1.4 淀粉合成关键酶活性测定方法第30-31页
            1.4.1 ADPG焦磷酸化酶和SSS可溶性淀粉合成酶活性测定方法第30-31页
            1.4.2 淀粉分支酶活性测定方法第31页
        1.5 淀粉合成关键酶基因及Os RSR1基因表达量测定第31-34页
            1.5.1 试剂第31页
            1.5.2 基因序列获取第31页
            1.5.3 荧光定量引物设计第31-32页
            1.5.4 总RNA的提取第32-33页
            1.5.5 c DNA第一条链合成第33页
            1.5.6 荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR )第33-34页
            1.5.7 RT-q PCR计算第34页
        1.6 数据分析第34页
    2 结果与分析第34-43页
        2.1 不同灌浆时期籽粒RNA提取第34-35页
        2.2 不同灌浆时期籽粒直链淀粉含量比较第35页
        2.3 不同灌浆时期籽粒淀粉合成关键酶活性比较第35-37页
        2.4 不同灌浆时期籽粒淀粉合成关键酶基因表达量比较第37-40页
            2.4.1 不同灌浆时期籽粒Os AGP基因表达量比较第37-38页
            2.4.2 不同灌浆时期籽淀粉合成酶基因表达量比较第38-39页
            2.4.3 不同灌浆时期籽粒OsSBE3基因表达量比较第39-40页
        2.5 不同灌浆时期籽粒Os RSR1因子表达量比较第40-41页
        2.6 籽粒转录因子和淀粉合成相关基因表达量与酶活性及淀粉含量关系第41-43页
    3 讨论第43-45页
        3.1 关于籽粒淀粉合成相关酶活性及其基因表达与直链淀粉含量关系第43-44页
        3.2 关于籽粒Os RSR1因子与籽粒淀粉合成相关酶基因表达关系第44-45页
第三章 水稻Os RSR1因子序列比较分析第45-60页
    1 材料与方法第45-50页
        1.1 试验材料第45-46页
            1.1.1 供试材料第45-46页
            1.1.2 菌种与载体第46页
            1.1.3 主要试剂第46页
            1.1.4 PCR扩增Os RSR1基因全c DNA第46页
            1.1.5 培养基第46页
        1.2 试验方法第46-50页
            1.2.1 水稻总RNA的提取第46-47页
            1.2.2 反转录c DNA链的合成第47页
            1.2.3 c DNA全长基因的获得第47-48页
            1.2.4 DNA片段的回收第48页
            1.2.5 DNA片段与克隆载体的连接第48-49页
            1.2.6 DNA片段的转化第49页
            1.2.7 质粒DNA提取(小量法)第49-50页
            1.2.8 质粒酶切验证第50页
            1.2.9 c DNA序列分析第50页
    2 结果与分析第50-58页
        2.1 总RNA提取与第一链c DNA合成第50-51页
        2.2 籽粒Os RSR1基因克隆及鉴定第51-52页
        2.3 籽粒Os RSR1因子核苷酸及氨基酸序列第52-55页
        2.4 籽粒Os RSR1基因全长c DNA序列比对第55-56页
        2.5 水稻Os RSR1基因序列结构分析第56-58页
    3 讨论第58-60页
第四章 Os RSR1基因沉默对淀粉合成关键酶基因表达及产量和品质性状的影响第60-85页
    1 试验材料与方法第61-71页
        1.1 试验材料第61-62页
            1.1.1 植物材料第61页
            1.1.2 菌株第61页
            1.1.3 质粒载体第61页
            1.1.4 试剂盒第61-62页
            1.1.5 试剂第62页
            1.1.6 培养基第62页
            1.1.7 PCR引物第62页
        1.2 试验方法第62-71页
            1.2.1 Os RSR1-RNAi干扰载体构建第62-67页
            1.2.2 水稻遗传转化及转基因植株分子检测第67-70页
            1.2.3 转基因株系性状测定第70-71页
    2 结果与分析第71-81页
        2.1 Os RSR1-RNAi干扰载体构建第71-74页
            2.1.1 Os RSR1-RNAi干扰载体的构建流程第71页
            2.1.2 RT-PCR法扩增水稻Os RSR1基因干扰区段第71-74页
        2.2 p BWA(V)HS-Os RSR1质粒转化农杆菌第74-76页
        2.3 Os RSR1 RNAi转基因水稻植株的获得第76页
        2.4 转基因植株T0代PCR检测第76-77页
        2.5 转基因植株T1代抗性检测第77-78页
            2.5.1 抗性植株筛选第77-78页
            2.5.2 转基因植株T1代PCR检测第78页
        2.6 Os RSR1-RNAi对淀粉合成相关酶基因表达量的影响第78-79页
        2.7 转基因株系与野生型对照淀粉合成关键酶基因表达量比较第79-80页
        2.8 Os RSR1 RNAi对产量和品质性状的影响第80-81页
    3 讨论第81-85页
        3.1 关于籽粒Os RSR1转录因子载体快速构建第81-82页
        3.2 农杆菌介导的Os RSR1-RNAi干扰载体遗传转化第82-83页
        3.3 Os RSR1基因沉默对淀粉合成关键酶基因表达及产量和品质性状的影响第83-85页
综合讨论第85-88页
    1 关于籽粒 Os RSR1 转录因子序列变异及表达调控机理第85-86页
    2 关于籽粒淀粉合成相关酶基因和 Os RSR1 转录因子表达调控以及直链淀粉含量超亲变异第86-88页
全文结论第88-89页
致谢第89-90页
参考文献第90-99页
附录第99-104页
缩略词表第104-105页
攻读博士学位期间发表的学术论文第105页

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