| 中文摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 实验材料与方法 | 第13-54页 |
| 一．实验材料 | 第13-18页 |
| （一）实验动物 | 第13页 |
| （二）主要仪器设备 | 第13-14页 |
| （三）实验主要试剂与耗材 | 第14-17页 |
| （四）实验主要试剂及配制 | 第17-18页 |
| 二．实验步骤与方法 | 第18-54页 |
| （一）Kit~w/Kit~(wv)小鼠ntESCs的建立及鉴定 | 第18-27页 |
| （二）TALENs修复Kit~w/Kit~(wv) ntESC Kit基因 | 第27-35页 |
| （三）修复前后Kit~w/Kit~(wv) ntESC体内生殖细胞分化 | 第35-39页 |
| （四） Kit~w/Kit~(wv) ntESCs的PGCLCs分化及鉴定 | 第39-48页 |
| （五） 修复后Kit~w/Kit~(wv) ntESCs分化来源的PGCLCs的精子发生检测 | 第48-52页 |
| （六）修复后Kit~w/Kit~(wv) ntESCs分化来源的精子功能检测 | 第52-54页 |
| 实验内容与结果 | 第54-82页 |
| 一．Kit~w/Kit~(wv)小鼠TTFS来源的NTESCS建立及多能性检测 | 第54-56页 |
| （一）Kit~w/Kit~(wv) ntESCs系的建立 | 第54-55页 |
| （二）Kit~w/Kit~(wv) ntESCs基因组完整性及多能性检测 | 第55-56页 |
| 二．Kit~w/Kit~(wv) NTESCS W位点的基因修复及体内生殖细胞特化的检测 | 第56-63页 |
| （一）利用TALENs对Kit~w/Kit~(wv) nt ESCs W位点进行基因修复 | 第56-59页 |
| （二）修复后Kit~w/Kit~(wv) ntESCs多能性检测 | 第59-62页 |
| （三）修复前后Kit~w/Kit~(wv) ntESCs体内生殖细胞分化能力的检测 | 第62-63页 |
| 三．修复前后Kit~w/Kit~(wv) NTESCS体外生殖细胞分化及检测 | 第63-70页 |
| （一）Kit~w/Kit~(wv) ntESCs向EpiLCs的分化及检测 | 第63-67页 |
| （二）EpiLCs向PGCLCs的分化及检测 | 第67-70页 |
| 四．修复后Kit~w/Kit~(wv) PGCLCS移植入Kit~w/Kit~(wv)小鼠睾丸中产生精子 | 第70-73页 |
| 五．RFP标记的修复后Kit~w/Kit~(wv) PGCLCS睾丸移植后产生健康子代 | 第73-77页 |
| （一）构建RFP标记的PGCLCs | 第73-74页 |
| （二）PGCLCs~(RFP)睾丸移植得到具有功能的配子 | 第74-77页 |
| 六．不带标记的修复后Kit~w/Kit~(wv) PGCLCS白消安造模小鼠睾丸移植得到健康子代 | 第77-82页 |
| 讨论 | 第82-87页 |
| 一．PGCLCS分化培养基中细胞因子起到最关键作用 | 第82-83页 |
| 二．利用NTESCS作为生殖细胞的分化资源具有多项优势 | 第83页 |
| 三．TALENS基因修复技术的优势及问题 | 第83-84页 |
| 四．ESC及IPSC分化为原始生殖细胞体系建立的必要性 | 第84页 |
| 五．ESC及IPSC分化来源的子代的检测 | 第84-85页 |
| 六．利用人类多能干细胞和诱导多能干细胞进行生殖细胞特化的可行性 | 第85-86页 |
| 七．建立体外减数分裂系统的必要性和可行性 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-94页 |
| 文献综述 生殖细胞体外基因编辑的研究进展 | 第94-123页 |
| 一．生殖细胞体内分化的进程 | 第95-98页 |
| （一）PGCs命运调控相关的转录因子 | 第95-96页 |
| （二）PGCs特化相关信号通路 | 第96-98页 |
| 二．生殖细胞体外分化的研究进展 | 第98-100页 |
| （一）生殖细胞分化在小鼠中的研究进展 | 第98-99页 |
| （二）人类胚胎干细胞和诱导多能干细胞生殖细胞分化的进展 | 第99-100页 |
| 三．生殖细胞体外基因编辑研究进展 | 第100-108页 |
| （一）基因编辑技术的发展 | 第100-106页 |
| （二）基因编辑技术在生殖细胞中的应用 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-123页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第123-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
