| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第11-25页 |
| 1.1 引言 | 第11页 |
| 1.2 丁醇生产的方法 | 第11-12页 |
| 1.2.1 羰基合成法 | 第11-12页 |
| 1.2.2 醇醛缩合法 | 第12页 |
| 1.2.3 ABE发酵法 | 第12页 |
| 1.3 产丁醇梭菌介绍 | 第12-14页 |
| 1.3.1 ABE发酵菌 | 第12页 |
| 1.3.2 ABE发酵法产丁醇的代谢过程 | 第12-14页 |
| 1.4 产丁醇梭菌基因表达技术 | 第14-15页 |
| 1.4.1 基于质粒的基因表达 | 第14页 |
| 1.4.2 同源重组至染色体的基因表达 | 第14-15页 |
| 1.5 产丁醇菌基因工程改造 | 第15-19页 |
| 1.5.1 EMP代谢途径基因改造 | 第15页 |
| 1.5.2 丙酮合成基因改造 | 第15-16页 |
| 1.5.3 乙酸合成基因改造 | 第16页 |
| 1.5.4 丁酸合成基因改造 | 第16页 |
| 1.5.5 生物乙醇/生物丁醇合成 | 第16-17页 |
| 1.5.6 丁醇耐受性基因改造 | 第17页 |
| 1.5.7 产溶剂抑制基因改造 | 第17-18页 |
| 1.5.8 孢子生成基因改造 | 第18页 |
| 1.5.9 产丁醇菌基因改组 | 第18-19页 |
| 1.6 丁醇发酵优化研究进展 | 第19-21页 |
| 1.6.1 不同原料发酵产丁醇研究 | 第19-20页 |
| 1.6.2 不同添加剂对发酵产丁醇研究 | 第20页 |
| 1.6.3 pH调控发酵研究进展 | 第20-21页 |
| 1.7 丁醇发酵产物分离研究进展 | 第21-22页 |
| 1.7.1 气提分离 | 第21页 |
| 1.7.2 液-液萃取分离 | 第21-22页 |
| 1.7.3 吸附分离 | 第22页 |
| 1.7.4 渗透蒸发分离 | 第22页 |
| 1.8 问题与总结 | 第22-23页 |
| 1.9 主要研究内容及实验技术路线 | 第23-25页 |
| 1.9.1 研究内容 | 第23-24页 |
| 1.9.2 本实验的技术路线 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-39页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第25-28页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.2 主要试剂与缓冲液配制 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法与步骤 | 第28-39页 |
| 2.2.1 乳酸乳球菌基因组DNA提取 | 第28-29页 |
| 2.2.2 电泳检测 | 第29页 |
| 2.2.3 DNA的纯度及浓度测定 | 第29页 |
| 2.2.4 目的基因的扩增 | 第29-31页 |
| 2.2.5 PCR产物回收 | 第31-32页 |
| 2.2.6 CaC12法制备感受态细胞 | 第32页 |
| 2.2.7 克隆载体pMD18-T的构建与筛选 | 第32-34页 |
| 2.2.8 pSOS94表达载体的构建 | 第34-36页 |
| 2.2.9 糖丁酸梭菌工程菌构建 | 第36-37页 |
| 2.2.10 工程菌杨木摇瓶发酵产丁醇及蛋白表达 | 第37-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-61页 |
| 3.1 pfkA基因的克隆与表达 | 第39-45页 |
| 3.1.1 乳酸球菌总DNA的提取 | 第39页 |
| 3.1.2 pfkA基因的扩增 | 第39-40页 |
| 3.1.3 pfkA基因与T载体连接 | 第40-42页 |
| 3.1.4 pSOS94-pfkA表达载体的构建 | 第42-45页 |
| 3.2 pyk基因的克隆与表达 | 第45-50页 |
| 3.2.1 pyk基因的扩增 | 第45-46页 |
| 3.2.2 pyk基因与T载体连接 | 第46-47页 |
| 3.2.3 pSOS94-pyk表达载体的构建 | 第47-50页 |
| 3.3 pfkA-pyk基因的克隆与表达 | 第50-55页 |
| 3.3.1 pfkA-pyk基因的扩增 | 第50-51页 |
| 3.3.2 pSOS94-pfkA-pyk表达载体的构建 | 第51-55页 |
| 3.4 产丁醇工程菌的构建与杨木发酵分析 | 第55-61页 |
| 3.4.1 产丁醇工程菌的构建 | 第55页 |
| 3.4.2 杨木发酵中细胞生长曲线及还原糖浓度变化 | 第55-56页 |
| 3.4.3 杨木发酵产物ABE标准曲线 | 第56-58页 |
| 3.4.4 ABE产量分析 | 第58-60页 |
| 3.4.5 丁醇耐受性分析 | 第60-61页 |
| 4 结论与展望 | 第61-65页 |
| 4.1 结论 | 第61页 |
| 4.2 讨论 | 第61-62页 |
| 4.2.1 基因过表达对细胞生长的影响 | 第61-62页 |
| 4.2.2 基因过表达对丁醇产量的影响 | 第62页 |
| 4.3 创新点 | 第62-63页 |
| 4.4 展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-75页 |
| 附录A 英文缩略词及中英文对照 | 第75-77页 |
| 附录B 攻读学位期间发表的学术论文 | 第77-79页 |
| 附录C pSOS94载体和pAN1载体图谱 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81页 |