| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-19页 |
| 1.1 蓝舌病概述 | 第11页 |
| 1.2 蓝舌病病毒病原学研究 | 第11-12页 |
| 1.3 蓝舌病疫苗的研究进展 | 第12-17页 |
| 1.3.1 传统蓝舌病疫苗 | 第12-14页 |
| 1.3.2 新型蓝舌病疫苗 | 第14-17页 |
| 1.4 总结与展望 | 第17-19页 |
| 第二章 BTV1多克隆抗体的制备与衣壳蛋白基因的克隆 | 第19-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 毒株、动物 | 第19页 |
| 2.1.2 菌种、载体、细胞 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第20页 |
| 2.1.5 主要溶液和培养基的配置 | 第20-21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 BTV1的细胞培养 | 第21页 |
| 2.2.2 BTV1病毒粒子的纯化与鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.3 BTV1多克隆抗体的制备 | 第22页 |
| 2.2.4 BTV1 VP2、VP3、VP5、VP7基因引物的设计与合成 | 第22页 |
| 2.2.5 BTV1 RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.6 RT-PCR克隆目的基因 | 第23页 |
| 2.2.7 目的基因的纯化回收 | 第23-24页 |
| 2.2.8 目的基因与pMD18-T载体的连接 | 第24页 |
| 2.2.9 连接产物的转化 | 第24页 |
| 2.2.10 重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.11 阳性质粒的提取 | 第25页 |
| 2.2.12 阳性质粒的测序 | 第25页 |
| 2.3 试验结果 | 第25-29页 |
| 2.3.1 纯化BTV病毒粒子的SDS-PAGE鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3.2 衣壳蛋白基因的RT-PCR扩增 | 第26-28页 |
| 2.3.3 BTV衣壳蛋白基因的克隆载体的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 BTV1衣壳蛋白的真核表达与活性鉴定 | 第31-48页 |
| 3.1 试验材料 | 第31-33页 |
| 3.1.1 菌种、质粒、细胞 | 第31页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第32页 |
| 3.1.4 主要溶液和培养基的配置 | 第32-33页 |
| 3.2 试验方法 | 第33-39页 |
| 3.2.1 感受态的制备 | 第33页 |
| 3.2.2 重组转座质粒pVP2、pVP3、pVP5与pVP7的构建及鉴定 | 第33-35页 |
| 3.2.3 重组杆粒rVP2、rVP3、rVP5与rVP7的构建与鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2.4 重组杆粒的精提取 | 第36-37页 |
| 3.2.5 Sf9细胞的复苏与培养 | 第37页 |
| 3.2.6 Sf9细胞的驯化 | 第37页 |
| 3.2.7 Sf9细胞的悬浮培养 | 第37-38页 |
| 3.2.8 重组杆粒转染Sf9细胞 | 第38页 |
| 3.2.9 重组杆状病毒的收获与培养 | 第38页 |
| 3.2.10 重组蛋白的SDS-PAGE与Western blotting分析 | 第38-39页 |
| 3.2.11 重组蛋白VP7的表达与纯化 | 第39页 |
| 3.3 试验结果 | 第39-46页 |
| 3.3.1 重组转座质粒菌液PCR鉴定 | 第39-41页 |
| 3.3.2 重组转座质粒的双酶切鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.3 重组杆粒的PCR鉴定 | 第42-44页 |
| 3.3.4 重组杆粒浓度测定 | 第44页 |
| 3.3.5 重组杆状转染Sf9细胞结果 | 第44页 |
| 3.3.6 重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第44-45页 |
| 3.3.7 重组蛋白的Western-blot分析 | 第45-46页 |
| 3.3.8 纯化重组VP7蛋白的SDS-PAGE分析 | 第46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 竞争ELISA检测方法的建立 | 第48-52页 |
| 4.1 试验材料 | 第48页 |
| 4.1.1 血清 | 第48页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第48页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第48页 |
| 4.2 试验方法 | 第48-50页 |
| 4.2.1 样品血清的抗体检测 | 第48-49页 |
| 4.2.2 试剂最佳工作浓度的滴定 | 第49页 |
| 4.2.3 竞争ELISA的试验步骤 | 第49-50页 |
| 4.2.4 竞争ELISA的结果判定 | 第50页 |
| 4.3 试验结果 | 第50-51页 |
| 4.3.1 各试剂最佳工作浓度测试结果 | 第50页 |
| 4.3.2 检测结果分析 | 第50-51页 |
| 4.4 讨论 | 第51-52页 |
| 第五章 全文结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简历 | 第60页 |
