| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第9-11页 |
| 2 材料与方法 | 第11-23页 |
| 2.1 试验材料 | 第11页 |
| 2.2 常用培养基的配制 | 第11页 |
| 2.3 PCR扩增L10 Wrab17 基因并获得CDS | 第11-13页 |
| 2.3.1 总 RNA 提取 | 第11-12页 |
| 2.3.2 反转录 | 第12页 |
| 2.3.3 引物设计 | 第12页 |
| 2.3.4 Wrab17 基因CDS序列的获得 | 第12-13页 |
| 2.4 小麦受叶锈菌侵染后Wrab17 蛋白的原核表达、纯化及其抗体制备 | 第13-14页 |
| 2.4.1 原核表达载体的构建 | 第13页 |
| 2.4.2 重组质粒原核诱导表达 | 第13-14页 |
| 2.4.3 蛋白质的纯化—镍柱亲和层析 | 第14页 |
| 2.4.4 兔抗Wrab17 抗血清制备 | 第14页 |
| 2.4.5 Wrab17 抗血清Western Blotting检测 | 第14页 |
| 2.5 小麦受叶锈菌侵染后Wrab17 基因表达量变化 | 第14-16页 |
| 2.5.1 受叶锈菌侵染后小麦Wrab17 基因半定量检测 | 第14-16页 |
| 2.5.2 小麦叶片接种叶锈菌后不同时间点Wrab17 蛋白表达量的Wstern blotting检测 | 第16页 |
| 2.6 亚细胞定位载体Wrab17-GFP的构建及检测 | 第16-17页 |
| 2.6.1 亚细胞定位载体Wrab17-GFP的构建 | 第16页 |
| 2.6.2 Wrab17-GFP注射烟草瞬时表达后检测 | 第16-17页 |
| 2.6.3 荧光显微镜检测GFP荧光蛋白信号 | 第17页 |
| 2.7 Wrab17 超表达植物表达载体的构建 | 第17-18页 |
| 2.7.1 Wrab17 基因的克隆 | 第17-18页 |
| 2.7.2 质粒提取 | 第18页 |
| 2.7.3 表达载体构建 | 第18页 |
| 2.8 Wrab17 基因RNAi表达载体的构建 | 第18-19页 |
| 2.8.1 Wrab17 基因正、反向片段的克隆 | 第18-19页 |
| 2.8.2 Wrab17 基因正、反向片段与载体的连接 | 第19页 |
| 2.9 农杆菌介导的Wrab17 RNAi和超表达载体的遗传转化 | 第19-21页 |
| 2.9.1 试验材料 | 第19页 |
| 2.9.2 试验方法 | 第19-20页 |
| 2.9.3 分子检测转化植株 | 第20-21页 |
| 2.10 Wrab17 基因沉默后的功能检测及验证 | 第21-23页 |
| 2.10.1 HR荧光染色 | 第21-22页 |
| 2.10.2 基因沉默效率的验证 | 第22-23页 |
| 3 结果与分析 | 第23-40页 |
| 3.1 小麦Wrab17 基因的克隆 | 第23-24页 |
| 3.2 叶锈菌侵染诱导产生的小麦Wrab17 蛋白的原核表达、纯化及其抗体制备 | 第24-27页 |
| 3.2.1 重组质粒Wrab17 -pET28a(+)的构建及其鉴定 | 第24页 |
| 3.2.2 Wrab17 在大肠杆菌中的表达 | 第24-25页 |
| 3.2.3 融合蛋白的纯化 | 第25-26页 |
| 3.2.4 重组蛋白Wrab17 的兔抗血清制备和特异性鉴定 | 第26-27页 |
| 3.3 受叶锈菌侵染后小麦Wrab17 基因的表达量变化 | 第27-28页 |
| 3.3.1 受叶锈菌侵染后小麦Wrab17 基因半定量检测 | 第27页 |
| 3.3.2 小麦叶片接种叶锈菌后不同时间点Wrab17 蛋白表达量的Wstern blotting检测 | 第27-28页 |
| 3.4 Wrab17 基因的亚细胞定位 | 第28-30页 |
| 3.4.1 Wrab17 基因亚细胞定位载体的构建 | 第28-29页 |
| 3.4.2 荧光显微镜检测GFP蛋白信号 | 第29-30页 |
| 3.5 Wrab17 基因全长的超表达载体构建 | 第30-32页 |
| 3.5.1 Wrab17 目的片段的获得 | 第30-31页 |
| 3.5.2 Wrab17 基因超表达载体构建 | 第31页 |
| 3.5.3 Wrab17 超表达载体的农杆菌转化 | 第31-32页 |
| 3.6 Wrab17 基因RNAi载体构建 | 第32-35页 |
| 3.6.1 Wrab17 正反向目的片段的获得 | 第32-33页 |
| 3.6.2 Wrab17 基因RNAi载体的构建 | 第33-35页 |
| 3.7 农杆菌介导的Wrab17 基因小麦成熟胚遗传转化 | 第35页 |
| 3.8 Wrab17 基因RNAi转化小麦植株的阳性检测 | 第35-36页 |
| 3.8.1 转化植株的PCR检测 | 第35-36页 |
| 3.8.2 Wrab17 基因RNAi转化植株的Southern blot杂交检测 | 第36页 |
| 3.9 小麦与叶锈菌互作中RNAi介导的Wrab17 沉默对HR-PCD的影响 | 第36-40页 |
| 3.9.1 Wrab17 基因沉默后的验证 | 第36-37页 |
| 3.9.2 Wrab17 基因沉默对HR-PCD的影响 | 第37-39页 |
| 3.9.3 Wrab17 基因沉默对孢子堆生长的影响 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 4.1 利用RNAi技术探讨基因功能的研究 | 第40页 |
| 4.2 Wrab17 基因在植物抗逆中的功能研究 | 第40-41页 |
| 4.3 ABA在植物抗病中的作用 | 第41-42页 |
| 5 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第46-47页 |
| 作者简历 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
