| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 前言 | 第9-22页 |
| 第一节 铜绿假单胞菌的生物特性以及毒力因子 | 第10-15页 |
| 1.1.1 铜绿假单胞菌的生物特性 | 第10-11页 |
| 1.1.2 铜绿假单胞菌的毒力因子 | 第11-13页 |
| 1.1.3 三型分泌系统（T3SS）与六型分泌系统（T6SS） | 第13-15页 |
| 第二节 铜绿假单胞菌毒力因子的调控 | 第15-17页 |
| 1.2.1 Gac/Rsm通路（双组份系统） | 第15-16页 |
| 1.2.2 铜绿假单胞菌中的调控sRNA | 第16-17页 |
| 第三节 多核苷酸磷酸化酶（Polynucleotide phosphorylase, PNPase） | 第17-20页 |
| 1.3.1 PNPase的结构与功能单位 | 第17-18页 |
| 1.3.2 PNPase的研究现状 | 第18-20页 |
| 第四节 本文研究目的意义以及技术线路 | 第20-22页 |
| 1.4.1 本文研究目的意义 | 第20-21页 |
| 1.4.2 本文研究的技术线路 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-45页 |
| 第一节 材料与试剂 | 第22-27页 |
| 2.1.1 实验菌株与质粒 | 第22-24页 |
| 2.1.2 RT-PCR引物序列 | 第24-25页 |
| 2.1.3 实验试剂与仪器 | 第25-27页 |
| 第二节 实验方法 | 第27-45页 |
| 2.2.1.微量质粒的提取 | 第27页 |
| 2.2.2.细菌基因组的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.3.PCR，特异性片段扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.4. 酶切和连接体系 | 第29-30页 |
| 2.2.5. E.coli化学感受态细胞转化 | 第30页 |
| 2.2.6. 铜绿假单胞菌转化感受态细胞的制备与转化 | 第30-31页 |
| 2.2.7.β-半乳糖苷酶活性的测定 | 第31页 |
| 2.2.8.敲除菌株的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.9.Western blot | 第33-34页 |
| 2.2.10 细菌RNA提取 | 第34-35页 |
| 2.2.11 RNA反转录为cDNA | 第35-36页 |
| 2.2.12 Real-Time PCR | 第36-37页 |
| 2.2.13 点突变菌株的构建 | 第37-38页 |
| 2.2.14 免疫共沉淀 | 第38-39页 |
| 2.2.15 细胞毒性检测 | 第39页 |
| 2.2.16 小鼠肺部急性感染模型 | 第39-40页 |
| 2.2.17 蛋白纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.18 RNA的体外转录 | 第41-42页 |
| 2.2.19 RNA EMSA实验 | 第42-43页 |
| 2.2.20 RNA稳定性分析 | 第43页 |
| 2.2.21 蹭行运动检测（Twitching motility） | 第43-44页 |
| 2.2.22 细菌的最低抑菌浓度（MIC）的测定 | 第44-45页 |
| 第三章 实验结果与分析讨论 | 第45-67页 |
| 第一节 pnp是铜绿假单胞菌的必需基因 | 第45-48页 |
| 3.1.1 pnp是铜绿假单胞菌的必需基因 | 第45-46页 |
| 3.1.2 pnp缺失菌株的构建 | 第46-48页 |
| 第二节 PNPase影响铜绿假单胞菌三型分泌系统及急性感染 | 第48-53页 |
| 3.2.1 PNPase会影响三型分泌系统的表达 | 第48页 |
| 3.2.2 PNPase影响铜绿假单胞菌细胞毒性以及小鼠肺部定植 | 第48-50页 |
| 3.2.3 PNPase的KH和S1结构域对于毒力的影响 | 第50-52页 |
| 3.2.4 exsA的过表达可以回补T3SS的缺失 | 第52-53页 |
| 第三节 PNPase影响多个基因的表达 | 第53-56页 |
| 第四节 铜绿假单胞菌多种毒力因子的变化 | 第56-59页 |
| 3.4.1 PNPase影响铜绿假单胞菌的蹭行能力 | 第56页 |
| 3.4.2 PNPase影响铜绿假单胞菌的六型分泌系统T6SS | 第56-59页 |
| 第五节 PNPase通过影响sRNA进一步调控毒力因子 | 第59-62页 |
| 3.5.1 Gac-Rsm双组份系统的表达变化 | 第59-60页 |
| 3.5.2 sRNA RsmY/Z的表达水平以及作用 | 第60-62页 |
| 第六节 PNPase会直接作用于sRNA | 第62-67页 |
| 3.6.1 PNPase影响sRNA RsmY/Z的稳定性 | 第62-64页 |
| 3.6.2 PNPase可以和sRNA RsmY/Z直接结合 | 第64-67页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与科研成果 | 第77页 |
