| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-40页 |
| 第一节 亚心型扁藻的应用研究进展 | 第13-26页 |
| 1 亚心型扁藻生物学特征概述 | 第13页 |
| 2 亚心型扁藻的细胞形态与结构 | 第13-15页 |
| 3 亚心型扁藻的繁殖 | 第15页 |
| 4 亚心型扁藻的基础研究和应用价值 | 第15-26页 |
| ·亚心型扁藻的培养 | 第15-18页 |
| ·亚心型扁藻的多糖 | 第18页 |
| ·亚心型扁藻产氢研究 | 第18-23页 |
| ·渗透压 | 第23页 |
| ·亚心型扁藻线粒体基因组 | 第23-26页 |
| 第二节 真核微藻基因工程研究进展 | 第26-39页 |
| 1 真核微藻细胞核转化系统 | 第26-33页 |
| ·细胞核转化系统的载体元件 | 第26-31页 |
| ·转化方法 | 第31-33页 |
| ·转基因藻株的稳定遗传 | 第33页 |
| 2 真核微藻叶绿体转化系统 | 第33-38页 |
| ·叶绿体基因组 | 第33-34页 |
| ·叶绿体转化系统的特点 | 第34-36页 |
| ·叶绿体遗传转化的原理 | 第36-38页 |
| ·转化方法 | 第38页 |
| 3 真核微藻线粒体转化系统 | 第38-39页 |
| 第三节 本论文研究内容和意义 | 第39-40页 |
| 第二章 亚心型扁藻细胞核核转化系统的建立 | 第40-74页 |
| 第一节 亚心型扁藻的培养 | 第40-48页 |
| 1 材料与方法 | 第41-44页 |
| ·藻株和培养条件 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·亚心型扁藻生长曲线测定 | 第41页 |
| ·藻种纯化和保种 | 第41-42页 |
| ·提取总基因组DNA | 第42页 |
| ·引物合成 | 第42-43页 |
| ·PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·序列比对与分析 | 第44页 |
| 2 结果与讨论 | 第44-47页 |
| ·亚心型扁藻生长曲线 | 第44-45页 |
| ·亚心型扁藻基因组DNA的提取 | 第45页 |
| ·亚心型扁藻分子标记的克隆和序列比对 | 第45-47页 |
| 3 结论 | 第47-48页 |
| 第二节 亚心型扁藻对不同选择压力的敏感性研究 | 第48-53页 |
| 1 材料与方法 | 第48-49页 |
| ·亚心型扁藻及培养方法 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·敏感性实验 | 第48-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-51页 |
| ·亚心型扁藻对六种抗生素的敏感性 | 第49-50页 |
| ·亚心型扁藻对除草剂草丁膦的敏感性 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 第三节 珠磨法介导绿色荧光蛋白在亚心型扁藻中的瞬间表达 | 第53-62页 |
| 1 材料与方法 | 第54-57页 |
| ·藻种、菌种和培养方法 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54-55页 |
| ·转化载体的制备 | 第55-56页 |
| ·原生质体制备 | 第56-57页 |
| ·珠磨法转化 | 第57页 |
| ·绿色荧光蛋白的瞬间表达 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-60页 |
| ·制备原生质体 | 第57-59页 |
| ·绿色荧光蛋白检测 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 第四节 草丁膦抗性基因在亚心型扁藻细胞核中的稳定表达 | 第62-74页 |
| 1 材料与方法 | 第62-69页 |
| ·藻种、菌种及培养方法 | 第62页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第62-63页 |
| ·转化质粒的制备 | 第63页 |
| ·基因枪转化 | 第63-64页 |
| ·珠磨法转化 | 第64-65页 |
| ·筛选 | 第65页 |
| ·亚心型扁藻基因组提取 | 第65页 |
| ·PCR扩增bar基因 | 第65-66页 |
| ·Southern杂交 | 第66-69页 |
| 2 结果 | 第69-72页 |
| ·除草剂草丁膦筛选亚心型扁藻抗性转化子 | 第69页 |
| ·PCR检测 | 第69-70页 |
| ·探针浓度检测 | 第70页 |
| ·Southern杂交 | 第70-71页 |
| ·基因枪法和珠磨法转化效率的比较 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-73页 |
| 4 本章小结 | 第73-74页 |
| 第三章 亚心型扁藻叶绿体转化系统的建立 | 第74-102页 |
| 第一节 亚心型扁藻叶绿体基因组同源区的克隆 | 第74-79页 |
| 1 材料与方法 | 第74-76页 |
| ·藻种、菌种及培养方法 | 第74页 |
| ·亚心型扁藻基因组的提取 | 第74页 |
| ·引物设计 | 第74-75页 |
| ·PCR | 第75页 |
| ·PCR产物的克隆、测序 | 第75-76页 |
| ·同源片段的拼接 | 第76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-78页 |
| ·亚心型扁藻基因组DNA的提取 | 第76页 |
| ·亚心型扁藻叶绿体基因组片段PCR结果 | 第76-77页 |
| ·PCR产物拼接 | 第77-78页 |
| 3 讨论 | 第78-79页 |
| 第二节 叶绿体转化载体的构建 | 第79-86页 |
| 1 材料与方法 | 第79-83页 |
| ·藻种、菌种及培养方法 | 第79页 |
| ·主要试剂 | 第79-80页 |
| ·亚心型扁藻基因组DNA的提取 | 第80页 |
| ·引物设计 | 第80-81页 |
| ·PCR扩增质粒片段 | 第81-82页 |
| ·PCR产物的克隆、测序 | 第82页 |
| ·制备质粒 | 第82页 |
| ·构建亚心型扁藻叶绿体转化质粒 | 第82-83页 |
| 2 结果与分析 | 第83-85页 |
| ·亚心型扁藻基因组DNA的提取 | 第83页 |
| ·质粒片段的扩增结果 | 第83-84页 |
| ·亚心型扁藻叶绿体表达载体 | 第84-85页 |
| 3 讨论 | 第85-86页 |
| 第三节 绿色荧光蛋白在亚心型扁藻叶绿体中的瞬间表达 | 第86-93页 |
| 1 材料与方法 | 第87-89页 |
| ·藻种、菌种及培养方法 | 第87页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第87-88页 |
| ·转化质粒的制备 | 第88页 |
| ·基因枪转化 | 第88页 |
| ·绿色荧光蛋白的检测 | 第88-89页 |
| 2 结果与分析 | 第89-92页 |
| ·荧光显微镜观察结果 | 第89页 |
| ·流式细胞仪分选 | 第89-90页 |
| ·绿色荧光蛋白的亚细胞定位 | 第90-92页 |
| 3 讨论 | 第92-93页 |
| 第四节 草丁膦抗性基因在亚心型扁藻叶绿体的稳定表达 | 第93-102页 |
| 1 材料与方法 | 第93-96页 |
| ·藻种、菌种及培养方法 | 第93页 |
| ·主要试剂及配制方法 | 第93页 |
| ·转化质粒的制备 | 第93页 |
| ·基因枪转化 | 第93-94页 |
| ·筛选 | 第94页 |
| ·亚心型扁藻基因组提取 | 第94页 |
| ·PCR检测 | 第94-96页 |
| ·Southern杂交 | 第96页 |
| 2 结果 | 第96-100页 |
| ·除草剂草丁膦筛选亚心型扁藻抗性转化子 | 第96页 |
| ·基因组提取 | 第96-97页 |
| ·PCR检测 | 第97-99页 |
| ·探针浓度检测 | 第99页 |
| ·Southern杂交 | 第99-100页 |
| 3 讨论 | 第100-101页 |
| 4 本章小结 | 第101-102页 |
| 本文主要结论和创新性 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-118页 |
| 发表和完成论文情况 | 第118-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
