| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-21页 |
| 1.1 番茄与致病疫霉互作简介 | 第10页 |
| 1.2 miRNA研究概况 | 第10-12页 |
| 1.2.1 miRNA的生成及调控机制 | 第10-12页 |
| 1.2.2 miRNA的功能研究策略 | 第12页 |
| 1.3 番茄与病原物互作中的miRNA | 第12-19页 |
| 1.3.1 miRNA与病害症状 | 第13-16页 |
| 1.3.2 miRNA与宿主防卫 | 第16-18页 |
| 1.3.3 miRNA与病原物逆防卫 | 第18-19页 |
| 1.4 miR1918研究概况 | 第19页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第19-21页 |
| 2 miR1918的生物信息学及表达特性分析 | 第21-32页 |
| 2.1 实验材料及仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 番茄中miR1918上游启动子元件的预测 | 第22页 |
| 2.2.2 番茄和致病疫霉中miR1918靶基因的预测 | 第22页 |
| 2.2.3 番茄和致病疫霉的培养 | 第22-23页 |
| 2.2.4 番茄和致病疫霉的处理及取材 | 第23页 |
| 2.2.5 总RNA的提取 | 第23页 |
| 2.2.6 miRNA的反转录及实时荧光定量PCR | 第23-25页 |
| 2.2.7 靶基因的反转录及实时荧光定量PCR | 第25-26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-30页 |
| 2.3.1 番茄中miR1918的上游启动子元件及靶基因分析 | 第26-27页 |
| 2.3.2 番茄中miR1918及其靶基因的表达特性分析 | 第27-28页 |
| 2.3.3 致病疫霉中miR1918的靶基因分析 | 第28-29页 |
| 2.3.4 致病疫霉中miR1918及其靶基因的表达特性分析 | 第29-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 2.5 小结 | 第31-32页 |
| 3 amiR1918表达载体的构建 | 第32-44页 |
| 3.1 实验材料及仪器 | 第32页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第32页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第32页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-39页 |
| 3.2.1 拟南芥的培养及其基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| 3.2.2 拟南芥miR159a前体基因的克隆 | 第33-36页 |
| 3.2.3 pMD19-amiR1918的构建 | 第36-39页 |
| 3.2.4 pBI121-amiR1918的构建 | 第39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-43页 |
| 3.3.1 pMD19-ath-pre-miR159a的鉴定 | 第39-41页 |
| 3.3.2 pMD19-amiR1918的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.3 pBI121-amiR1918的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43页 |
| 3.5 小结 | 第43-44页 |
| 4 miR1918在番茄与致病疫霉互作中的功能分析 | 第44-54页 |
| 4.1 实验材料及仪器 | 第44页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第44页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第44页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-47页 |
| 4.2.1 根癌农杆菌工程菌的获得 | 第44-45页 |
| 4.2.2 根癌农杆菌渗透法瞬时转化番茄叶片 | 第45-46页 |
| 4.2.3 根癌农杆菌介导的叶盘法转化番茄 | 第46-47页 |
| 4.2.4 稳定表达amiR1918后番茄的抗性检测 | 第47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-52页 |
| 4.3.1 根癌农杆菌工程菌的鉴定 | 第47-48页 |
| 4.3.2 瞬时表达amiR1918后番茄抗性的变化 | 第48-49页 |
| 4.3.3 稳定表达amiR1918转基因番茄植株的鉴定 | 第49-50页 |
| 4.3.4 稳定表达amiR1918后番茄抗性的变化 | 第50-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-53页 |
| 4.5 小结 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 附录A 培养基配制方法 | 第62-63页 |
| 附录B 质粒图谱 | 第63-64页 |
| 附录C 基因序列 | 第64-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
