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IKKα/β-shRNA真核表达载体的构建及稳定低表达IKKβ HUVECs系的建立

摘要第1-4页
ABSTRACT第4-7页
英文缩写及全称和中文对照表第7-9页
第一章 引言第9-11页
第二章 材料与方法第11-23页
   ·主要材料及试剂第11-12页
   ·实验主要仪器和设备第12-13页
   ·主要试剂的配制第13-14页
   ·方法第14-22页
     ·靶向IKKα、IKKβ基因shRNA序列的设计合成第14-16页
     ·靶向IKKα、IKKβ基因重组载体的构建和鉴定第16-19页
       ·引物退火第16页
       ·酶切和连接第16-17页
       ·连接产物转化TOP10感受态细胞第17页
       ·重组质粒的鉴定第17-18页
       ·重组质粒的提取第18页
       ·重组质粒的酶切鉴定第18-19页
       ·测序鉴定第19页
     ·转染重组质粒对HUVECs中IKKα/β表达的影响第19-21页
       ·HUVECs的培养第19页
       ·重组质粒转染HUVECs第19-20页
       ·Western blot法检测HUVECs IKKα/β蛋白的表达第20-21页
     ·IKKβ基因稳定表达细胞系的建立第21-22页
       ·G418最佳筛选浓度的确定第21-22页
       ·稳定转染第22页
       ·稳定表达细胞系的鉴定第22页
   ·数据处理第22-23页
第三章 结果第23-29页
   ·重组质粒酶切鉴定第23页
   ·重组质粒测序鉴定第23-24页
   ·细胞转染效率的检测第24-25页
   ·shRNA对HUVECs中IKKα/β蛋白表达的影响第25-27页
   ·稳定表达细胞系的筛选第27页
   ·稳定表达细胞系的鉴定第27-29页
第四章 讨论第29-33页
第五章 结论第33-34页
参考文献第34-37页
致谢第37-38页
综述第38-43页
 参考文献第41-43页
攻读学位期间的研究成果第43页

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