| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 前言 | 第11-26页 |
| 第一部分 c-Myc ASODN联合5-Fu对HepG2细胞生物学特性的影响 | 第26-43页 |
| 引言 | 第26-27页 |
| 1 材料 | 第27-30页 |
| 1.1 细胞系 | 第27页 |
| 1.2 主要试剂 | 第27-29页 |
| 1.3 主要仪器 | 第29页 |
| 1.4 试剂配制 | 第29-30页 |
| 2 方法 | 第30-36页 |
| 2.1 c-Myc ASODN复合物的制备及转染步骤 | 第30-31页 |
| 2.2 MTT比色法检测HepG2细胞增殖抑制率 | 第31页 |
| 2.3 荧光显微镜下细胞形态 | 第31页 |
| 2.4 HepG2细胞侵袭实验 | 第31-32页 |
| 2.5 流式细胞仪检测HepG2细胞周期及凋亡 | 第32页 |
| 2.6 RT-PCR检测c-Myc mRNA的表达变化 | 第32-34页 |
| 2.7 免疫组化检测c-Myc蛋白的表达 | 第34-35页 |
| 2.8 统计学处理 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-40页 |
| 3.1 c-Myc ASODN转染后细胞形态学改变 | 第36页 |
| 3.2 c-Myc ASODN联合5-Fu对HepG2细胞增殖抑制的影响 | 第36-37页 |
| 3.3 c-Myc ASODN联合5-Fu抑制HepG2细胞侵袭 | 第37页 |
| 3.4 c-Myc ASODN联合5-Fu对HepG2细胞凋亡的影响 | 第37-38页 |
| 3.5 c-Myc ASODN联合5-Fu对c-Myc mRNA表达的影响 | 第38-39页 |
| 3.6 c-Myc ASODN联合5-Fu对c-Myc蛋白表达的影响 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 5 结论 | 第42-43页 |
| 第二部分 调控let-7c对c-Myc表达和HepG2细胞生物学功能的影响 | 第43-63页 |
| 引言 | 第43-44页 |
| 1 材料 | 第44-46页 |
| 1.1 细胞系 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂 | 第44-45页 |
| 1.3 主要仪器 | 第45-46页 |
| 2 方法 | 第46-54页 |
| 2.1 HepG2细胞培养 | 第46-47页 |
| 2.2 let-7c mimic和let-7c inhibitor瞬时转染 | 第47-48页 |
| 2.3 MTT比色法检测HepG2细胞增殖抑制率 | 第48页 |
| 2.4 流式细胞仪检测细胞周期和凋亡 | 第48-49页 |
| 2.5 RT-PCR检测let-7c和c-Myc mRNA表达的变化 | 第49-51页 |
| 2.6 Western blotting检测c-Myc蛋白的表达变化 | 第51-52页 |
| 2.7 双荧光素酶报告基因法检测let-7c的靶基因 | 第52-53页 |
| 2.8 统计学方法 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-59页 |
| 3.1 let-7c mimic在HepG2细胞内的转染效果 | 第54页 |
| 3.2 HepG2细胞增殖的检测 | 第54-55页 |
| 3.3 HepG2细胞周期和凋亡的检测 | 第55-56页 |
| 3.4 转染let-7c mimic后c-Myc mRNA表达的变化 | 第56页 |
| 3.5 转染let-7c mimic后c-Myc蛋白表达的变化 | 第56-57页 |
| 3.6 双荧光素酶报告基因法检测c-Myc是let-7c的靶基因 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 第三部分 let-7c介导c-Myc基因逆转肝癌多药耐药机制的研究 | 第63-83页 |
| 引言 | 第63-65页 |
| 1 材料 | 第65-66页 |
| 1.1 细胞系 | 第65-66页 |
| 1.2 主要试剂 | 第66页 |
| 1.3 主要仪器 | 第66页 |
| 2 方法 | 第66-72页 |
| 2.1 HepG2和HepG2/5-Fu细胞培养 | 第66页 |
| 2.2 let-7c mimic和let-7c inhibitor瞬时转染 | 第66-67页 |
| 2.3 MTT比色法检测HepG2/HepG2/5-Fu细胞增殖抑制率 | 第67页 |
| 2.4 药物敏感性测定 | 第67-68页 |
| 2.5 RT-PCR检测let-7c和c-Myc mRNA的表达 | 第68-71页 |
| 2.6 Western blotting检测c-Myc蛋白表达 | 第71页 |
| 2.7 统计学方法 | 第71-72页 |
| 3 结果 | 第72-80页 |
| 3.1 不同浓度顺铂、长春新碱和5-Fu下HepG2和HepG2/5-Fu细胞IC50 | 第72页 |
| 3.2 HepG2/5-Fu细胞对顺铂、长春新碱和5-Fu耐药性检测 | 第72-73页 |
| 3.3 HepG2和HepG2/5-Fu细胞凋亡及周期测定 | 第73-74页 |
| 3.4 let-7c mimic调控let-7c和c-Myc在HepG2和HepG2/5-Fu细胞表达 | 第74页 |
| 3.5 HepG2细胞和HepG2/5-Fu细胞c-Myc蛋白表达 | 第74-75页 |
| 3.6 let-7c mimic通过上调let-7c和抑制c-Myc表达,提高HepG2/5-Fu细胞对化疗药物的敏感性 | 第75-77页 |
| 3.7 let-7c inhibitor通过下调let-7c导致c-Myc高表达,降低耐药株HepG2/5-Fu细胞对化疗药物的敏感性 | 第77-80页 |
| 4 讨论 | 第80-82页 |
| 5 结论 | 第82-83页 |
| 全文总结 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-97页 |
| 缩略词表 | 第97-98页 |
| 附录 在学期间研究成果 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
