| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-26页 |
| 1.1 重金属危害及污染现状 | 第16-17页 |
| 1.1.1 重金属及其危害性 | 第16页 |
| 1.1.2 污染来源及现状 | 第16-17页 |
| 1.2 土壤重金属污染治理修复 | 第17-18页 |
| 1.2.1 传统修复 | 第17页 |
| 1.2.2 生物修复 | 第17-18页 |
| 1.3 植物螯合肽 | 第18-23页 |
| 1.3.1 PCs的作用 | 第19-20页 |
| 1.3.2 PCs生物合成与解毒机理 | 第20-21页 |
| 1.3.3 植物螯合肽合成酶(PCS) | 第21-23页 |
| 1.4 桑树重金属耐受性及研究动态 | 第23-24页 |
| 1.5 植物转基因技术 | 第24页 |
| 1.6 桑树转基因技术研究现状 | 第24-26页 |
| 第二章 引言 | 第26-30页 |
| 2.1 研究背景及意义 | 第26-27页 |
| 2.2 主要研究内容 | 第27-28页 |
| 2.3 技术路线 | 第28-30页 |
| 第三章 川桑PCS基因生物信息学分析 | 第30-42页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第30-32页 |
| 3.1.1 材料 | 第30页 |
| 3.1.2 基因序列信息的获得 | 第30页 |
| 3.1.3 主要信息学分析软件 | 第30页 |
| 3.1.4 主要试剂及溶液的配制方法 | 第30-32页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第32页 |
| 3.2 方法 | 第32-36页 |
| 3.2.1 川桑PCS基因的鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.2 RNA的提取及质量检测 | 第33页 |
| 3.2.3 cDNA第一链合成 | 第33页 |
| 3.2.4 川桑PCS基因的克隆 | 第33-36页 |
| 3.2.5 PCS基因的对序列比对及系统发生分析 | 第36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-40页 |
| 3.3.1 川桑PCS基因的鉴定预测 | 第36-37页 |
| 3.3.2 桑树植物螯合肽合成酶基因在川桑不同组织的表达分析 | 第37-38页 |
| 3.3.3 桑树植物螯合肽合成酶基因的克隆及信息学分析 | 第38-40页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 桑树PCS基因胁迫诱导表达分析 | 第42-50页 |
| 4.1 材料与主要试剂仪器 | 第42-43页 |
| 4.1.1 材料 | 第42页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第42页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第42-43页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-45页 |
| 4.2.1 RNA的提取及质量检测 | 第43页 |
| 4.2.2 cDNA第一链的合成 | 第43-44页 |
| 4.2.3 荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第44页 |
| 4.2.4 qRT-PCR | 第44页 |
| 4.2.5 结果计算 | 第44-45页 |
| 4.3 结果与分析 | 第45-48页 |
| 4.3.1 MaPCS1 | 第45-46页 |
| 4.3.2 MaPCS2 | 第46-48页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 桑树植物螯合肽合成酶基因的遗传转化及功能研究 | 第50-82页 |
| 5.1 实验材料与主要试剂 | 第50-57页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第50页 |
| 5.1.2 主要试剂及溶液配制方法 | 第50-56页 |
| 5.1.2.1 主要试剂 | 第50-56页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第56-57页 |
| 5.2 实验方法 | 第57-65页 |
| 5.2.1 转基因过表达载体的构建 | 第57-59页 |
| 5.2.2 农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第59-60页 |
| 5.2.3 农杆菌的检测及甘油菌农杆菌的制备 | 第60页 |
| 5.2.4 拟南芥的种植及转化 | 第60-61页 |
| 5.2.5 烟草叶盘转化法 | 第61-62页 |
| 5.2.6 转基因阳性植株的分子鉴定 | 第62-64页 |
| 5.2.7 桑树植物螯合肽合成酶基因的功能研究 | 第64-65页 |
| 5.3 结果与分析 | 第65-80页 |
| 5.3.1 桑树植物螯合肽合成酶基因的转基因载体构建 | 第65-66页 |
| 5.3.2 桑树植物螯合肽合成酶基因在拟南芥中的过表达 | 第66-70页 |
| 5.3.3 桑树植物螯合肽合成酶基因在烟草中的过表达 | 第70-73页 |
| 5.3.4 转基因植株中基因的功能研究 | 第73-80页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第80-82页 |
| 第六章 桑树转基因技术 | 第82-96页 |
| 6.1 实验材料与试剂 | 第82-85页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第82页 |
| 6.1.2 主要试剂及溶液配制方法 | 第82-84页 |
| 6.1.3 主要仪器 | 第84-85页 |
| 6.2 实验方法 | 第85-90页 |
| 6.2.1 桑树注射转化 | 第85页 |
| 6.2.2 桑树套袋、人工授粉及种子的收集 | 第85-86页 |
| 6.2.3 桑树种子的种植与筛选 | 第86页 |
| 6.2.4 基因组PCR检测 | 第86-87页 |
| 6.2.5 转基因桑树的qRT-PCR检测 | 第87页 |
| 6.2.6 Southern blotting检测 | 第87-90页 |
| 6.3 结果与分析 | 第90-94页 |
| 6.3.1 桑树冬芽注射统计 | 第90-91页 |
| 6.3.2 阳性个体筛选及分子鉴定 | 第91-92页 |
| 6.3.3 T2代桑树幼苗阳性鉴定 | 第92-94页 |
| 6.3.4 阳性植株分子鉴定 | 第94页 |
| 6.4 小结与讨论 | 第94-96页 |
| 第七章 综合与讨论 | 第96-100页 |
| 参考文献 | 第100-108页 |
| 附录 | 第108-110页 |
| 在读期间发表论文及参加课题 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
