| 致谢 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-19页 |
| 1.1 二羟基丙酮 | 第9-12页 |
| 1.1.1 二羟基丙酮的用途 | 第9-10页 |
| 1.1.2 二羟基丙酮的生产制备方法 | 第10-12页 |
| 1.2 脂肪酶 | 第12-14页 |
| 1.2.1 脂肪酶的结构特点 | 第12页 |
| 1.2.2 脂肪酶的优势 | 第12页 |
| 1.2.3 脂肪酶的分类 | 第12-13页 |
| 1.2.4 脂肪酶的催化机理 | 第13页 |
| 1.2.5 脂肪酶催化的特异性 | 第13-14页 |
| 1.2.6 细菌属脂肪酶与嗜冷脂肪酶 | 第14页 |
| 1.3 脱氢酶 | 第14-16页 |
| 1.3.1 脱氢酶的反应机理 | 第14-15页 |
| 1.3.2 甘油脱氢酶 | 第15页 |
| 1.3.3 甘油脱氢酶的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4 大肠杆菌表达系统 | 第16-17页 |
| 1.4.1 大肠杆菌表达系统的包涵体问题 | 第16页 |
| 1.4.2 包涵体问题的解决方法及优缺点 | 第16-17页 |
| 1.5 甘油的检测 | 第17页 |
| 1.6 DHA的检测 | 第17-18页 |
| 1.7 复合酶体系的构想及背景 | 第18页 |
| 1.8 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 第二章 南极嗜冷脂肪酶Lip7195基因的克隆表达 | 第19-35页 |
| 2.1 实验仪器与材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.2 主要试剂及酶 | 第20页 |
| 2.1.3 培养基及储液配置 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-30页 |
| 2.2.1 目的基因的设计及合成 | 第21页 |
| 2.2.2 PCR扩增目的基因 | 第21-24页 |
| 2.2.3 重组质粒pET-20b-lip7195、pTrc99a-lip7195的构建 | 第24-28页 |
| 2.2.4 重组嗜冷脂肪酶LIP7195的诱导表达 | 第28页 |
| 2.2.5 重组蛋白SDS-PAGE分析 | 第28-30页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第30-34页 |
| 2.3.1 Lip7195基因的密码子优化 | 第30-32页 |
| 2.3.2 重组载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.3.3 重组蛋白的低温诱导、收集及SDS-PAGE分析 | 第33-34页 |
| 2.4 本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 南极嗜冷脂肪酶LIP7195可溶性表达优化及酶学性能表征 | 第35-50页 |
| 3.1 实验仪器与材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第35-36页 |
| 3.1.2 主要试剂及酶 | 第36页 |
| 3.1.3 培养基及储液配置 | 第36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-43页 |
| 3.2.1 重组质粒pTrc99a7195lys、pTrc99a7195arg的构建 | 第36-39页 |
| 3.2.2 融合基因Lip7195-lys、Lip7195-arg的诱导表达 | 第39-40页 |
| 3.2.3 蛋白质浓度测定方法 | 第40-41页 |
| 3.2.4 重组LIP7195的酶活测定 | 第41-42页 |
| 3.2.5 嗜冷脂肪酶的氨基酸多序列比对 | 第42-43页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第43-49页 |
| 3.3.1 多聚阳离子融合氨基酸标签的添加 | 第43页 |
| 3.3.2 重组LIP7195的诱导表达及纯化 | 第43-44页 |
| 3.3.3 重组LIP7195的酶学性能表征 | 第44-48页 |
| 3.3.4 嗜冷脂肪酶的氨基酸多序列比对 | 第48-49页 |
| 3.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 第四章 大肠杆菌甘油脱氢酶EcogldA的克隆表达及酶学性能表征 | 第50-60页 |
| 4.1 实验仪器与材料 | 第50-51页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第50-51页 |
| 4.1.2 主要试剂及酶 | 第51页 |
| 4.1.3 培养基及储液配制 | 第51页 |
| 4.2 实验方法 | 第51-54页 |
| 4.2.1 目的基因的设计及合成 | 第51页 |
| 4.2.2 克隆载体pET-20b-gldA的构建 | 第51-53页 |
| 4.2.3 重组EcogldA的诱导表达及纯化 | 第53页 |
| 4.2.4 重组EcogldA的SDS-PAGE分析 | 第53页 |
| 4.2.5 蛋白质浓度测定 | 第53-54页 |
| 4.2.6 重组EcogldA的酶活测定 | 第54页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第54-59页 |
| 4.3.1 大肠杆菌JM109基因组的提取 | 第54-55页 |
| 4.3.2 克隆载体pET-20b-gldA的构建 | 第55页 |
| 4.3.3 重组蛋白的低温诱导及纯化 | 第55-56页 |
| 4.3.4 纯化后重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第56页 |
| 4.3.5 重组EcogldA的酶学性质测定 | 第56-59页 |
| 4.4 本章小结 | 第59-60页 |
| 第五章 构建复合酶协同催化体系制备二羟基丙酮 | 第60-70页 |
| 5.1 实验仪器与材料 | 第60页 |
| 5.1.1 实验仪器 | 第60页 |
| 5.1.2 主要试剂及储液配制 | 第60页 |
| 5.2 实验方法 | 第60-62页 |
| 5.2.1 气相色谱法检测甘油、DHA标准品 | 第60-61页 |
| 5.2.2 构建复合酶体系协同催化方法 | 第61-62页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第62-69页 |
| 5.3.1 甘油和DHA硅烷化产物的气相色谱分析 | 第62-65页 |
| 5.3.2 复合酶协同催化制备DHA | 第65-69页 |
| 5.4 本章小结 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
