| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 绪论 | 第20-32页 |
| 1.1 虫霉目真菌研究进展 | 第20-22页 |
| 1.1.1 虫霉目真菌概述 | 第20页 |
| 1.1.2 虫霉目真菌的侵染循环 | 第20-21页 |
| 1.1.3 虫霉目真菌的分子生物学研究进展 | 第21-22页 |
| 1.2 真菌分生孢子形成调控机制 | 第22-25页 |
| 1.2.1 G蛋白相关信号途径 | 第22-23页 |
| 1.2.2 cAMP信号相关途径 | 第23-24页 |
| 1.2.3 MAPK信号途径 | 第24页 |
| 1.2.4 光感应以及其他信号通路 | 第24-25页 |
| 1.3 基于新一代高通量测序技术的转录组测序(RNA-seq) | 第25-27页 |
| 1.3.1 新一代高通量测序技术简介 | 第25-26页 |
| 1.3.2 RNA-seq技术 | 第26页 |
| 1.3.3 RNA-seq测序的基本流程 | 第26-27页 |
| 1.4 内参基因筛选涉及的技术和软件 | 第27-29页 |
| 1.4.1 实时定量PCR技术 | 第27-28页 |
| 1.4.2 筛选内参基因 | 第28-29页 |
| 1.4.3 候选内参稳定性评估软件 | 第29页 |
| 1.5 研究目标与意义 | 第29-30页 |
| 1.6 课题来源及论文的内容安排 | 第30-32页 |
| 2 新蚜虫疠霉的RNA-seq数据分析 | 第32-47页 |
| 2.1 实验材料及仪器 | 第32页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第32页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-36页 |
| 2.2.1 材料收集 | 第32-33页 |
| 2.2.2 样品RNA提取 | 第33页 |
| 2.2.3 测序样品的准备 | 第33页 |
| 2.2.4 转录组文库构建及测序 | 第33-34页 |
| 2.2.5 测序结果数据分析 | 第34页 |
| 2.2.6 基因功能注释与分类 | 第34-35页 |
| 2.2.7 不同生长状态差异表达基因分析 | 第35-36页 |
| 2.2.7.1 差异表达基因分析 | 第35页 |
| 2.2.7.2 差异表达基因的GO功能显著富集 | 第35页 |
| 2.2.7.3 差异表达基因的pathway富集分析 | 第35-36页 |
| 2.3 结果与分析 | 第36-45页 |
| 2.3.1 样品RNA检测结果 | 第36页 |
| 2.3.2 原始测序reads质量基本统计结果 | 第36-37页 |
| 2.3.3 Reads预处理后数据统计结果 | 第37-39页 |
| 2.3.4 数据库比对结果 | 第39-40页 |
| 2.3.5 基因功能注释 | 第40-43页 |
| 2.3.5.1 GO功能注释 | 第40-41页 |
| 2.3.5.2 KEGG数据库功能注释 | 第41-43页 |
| 2.3.6 不同生长阶段差异表达基因 | 第43-45页 |
| 2.3.6.1 差异表达基因的筛选 | 第43页 |
| 2.3.6.2 差异基因的GO富集分析 | 第43-44页 |
| 2.3.6.3 Pathway显著性富集分析 | 第44-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-47页 |
| 3 新蚜虫疠霉内参基因的筛选 | 第47-58页 |
| 3.1 实验材料及仪器 | 第47-48页 |
| 3.1.1 菌株来源 | 第47页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第47页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第47-48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-50页 |
| 3.2.1 样品准备 | 第48页 |
| 3.2.2 总RNA的提取 | 第48-49页 |
| 3.2.3 反转录 | 第49页 |
| 3.2.4 候选内参基因的选择和引物设计 | 第49页 |
| 3.2.5 实时荧光定量PCR | 第49页 |
| 3.2.6 标准曲线的绘制及基因扩增效率 | 第49页 |
| 3.2.7 数据分析 | 第49-50页 |
| 3.3 结果与分析 | 第50-56页 |
| 3.3.1 候选内参基因引物扩增效率及特异性 | 第50-54页 |
| 3.3.2 各候选内参基因的表达水平 | 第54页 |
| 3.3.3 不同生长状态各候选内参基因表达稳定性分析 | 第54-56页 |
| 3.3.4 最佳内参基因可选数的筛选 | 第56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-58页 |
| 4 产孢相关差异表达基因的筛选与验证 | 第58-67页 |
| 4.1 实验材料及仪器 | 第58-59页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第58页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第58页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第58-59页 |
| 4.2 实验方法 | 第59-63页 |
| 4.2.1 产孢相关差异表达基因的选择 | 第59页 |
| 4.2.2 qRT-PCR引物设计 | 第59-62页 |
| 4.2.3 cDNA的合成 | 第62页 |
| 4.2.4 qRT-PCR验证产孢相关差异表达基因 | 第62-63页 |
| 4.2.5 差异表达基因分析 | 第63页 |
| 4.3 结果与分析 | 第63-66页 |
| 4.3.1 产孢相关差异表达基因的筛选 | 第63-65页 |
| 4.3.2 qRT-PCR分析产孢相关差异表达基因 | 第65-66页 |
| 4.4 讨论 | 第66-67页 |
| 5 蓝光受体蛋白wc-1 基因全长获得及表达分析 | 第67-85页 |
| 5.1 实验材料及仪器 | 第67-68页 |
| 5.1.1 供试菌株 | 第67页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第67页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第67页 |
| 5.1.4 引物 | 第67-68页 |
| 5.2 实验方法 | 第68-75页 |
| 5.2.1 蓝光受体蛋白wc-1 基因核心片段的克隆 | 第68-69页 |
| 5.2.1.1 总RNA的提取及cDNA的合成 | 第68页 |
| 5.2.1.2 wc-1 核心片段引物的设计 | 第68页 |
| 5.2.1.3 PCR扩增 | 第68-69页 |
| 5.2.1.4 割胶回收 | 第69页 |
| 5.2.1.5 产物连接 | 第69页 |
| 5.2.1.6 质粒转化 | 第69页 |
| 5.2.1.7 阳性克隆菌株的筛选 | 第69页 |
| 5.2.2 新蚜虫疠霉wc-1 RACE克隆 | 第69-73页 |
| 5.2.2.1 5' RACE合成 | 第70-72页 |
| 5.2.2.2 3' RACE合成 | 第72-73页 |
| 5.2.2.3 wc-1 cDNA全长序列的确定及分析 | 第73页 |
| 5.2.3 不同波长光源对新蚜虫疠霉孢子产量的影响 | 第73-74页 |
| 5.2.3.1 弹孢试验装置的制作 | 第73页 |
| 5.2.3.2 虫霉弹孢胶囊的制作 | 第73-74页 |
| 5.2.3.3 弹孢 | 第74页 |
| 5.2.3.4 数据处理和分析 | 第74页 |
| 5.2.4 蓝光照射新蚜虫疠霉处理及wc-1 表达量的检测 | 第74-75页 |
| 5.2.4.1 光源 | 第74页 |
| 5.2.4.2 光源蓝光处理及cDNA样品制备 | 第74-75页 |
| 5.2.4.3 荧光定量反应体系的建立 | 第75页 |
| 5.2.4.4 蓝光照射的新蚜虫疠霉wc-1 表达量检测 | 第75页 |
| 5.2.4.5 数据统计与分析 | 第75页 |
| 5.3 实验结果 | 第75-83页 |
| 5.3.1 新蚜虫疠霉蓝光受体蛋白基因wc-1 的克隆与分析 | 第75-80页 |
| 5.3.1.1 wc-1 RACE PCR及核心片断的PCR扩增 | 第75-76页 |
| 5.3.1.2 wc-1 cDNA全长序列的分子特征 | 第76-78页 |
| 5.3.1.3 wc-1 cDNA预测的氨基酸序列分析 | 第78-79页 |
| 5.3.1.4 wc-1 的同源性分析及进化树的构建 | 第79-80页 |
| 5.3.2 不同波长光照对新蚜虫疠霉产孢量的影响 | 第80-81页 |
| 5.3.3 蓝光对新蚜虫疠霉wc-1 表达量的影响 | 第81-83页 |
| 5.3.3.1 引物特异性及扩增效率 | 第81-82页 |
| 5.3.3.2 蓝光对新蚜虫疠霉wc-1 表达量的影响 | 第82-83页 |
| 5.4 讨论 | 第83-85页 |
| 6 总结与展望 | 第85-88页 |
| 6.1 总结 | 第85-86页 |
| 6.2 创新点 | 第86-87页 |
| 6.3 展望 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-98页 |
| 作者简历 | 第98页 |
