| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略符号(abbreviations) | 第10-14页 |
| 1 引言 | 第14-32页 |
| 1.1 细胞色素P450的简介 | 第16-26页 |
| 1.1.1 P450的分类和命名 | 第16-17页 |
| 1.1.2 P450的电子传递系统 | 第17-18页 |
| 1.1.3 P450的催化反应周期 | 第18-19页 |
| 1.1.4 P450的分子结构 | 第19-21页 |
| 1.1.5 放线菌的P450 | 第21-24页 |
| 1.1.6 阿维链霉菌S.avermitilis的P450酶 | 第24-26页 |
| 1.2 二氢黄酮的研究概述 | 第26-28页 |
| 1.3 他汀类药物的研究概述 | 第28-29页 |
| 1.4 本课题研究内容、目的和意义 | 第29-32页 |
| 2 实验仪器、材料与主要试剂 | 第32-39页 |
| 2.1 实验仪器 | 第32-33页 |
| 2.2 实验材料 | 第33-34页 |
| 2.3 主要试剂的配制 | 第34-39页 |
| 2.3.1 抗生素溶液的配制 | 第34-35页 |
| 2.3.2 蛋白表达所需试剂的配制 | 第35页 |
| 2.3.3 蛋白大量表达过程中所需试剂配制 | 第35-36页 |
| 2.3.4 SDS-PAGE电泳缓冲液的配制 | 第36-37页 |
| 2.3.5 蛋白纯化缓冲溶液的配制 | 第37页 |
| 2.3.6 反应催化的缓冲溶液的配制 | 第37-39页 |
| 3 研究内容和方案 | 第39-48页 |
| 3.1 质粒的转化和目的基因的表达 | 第39-41页 |
| 3.1.1 感受态的制备 | 第39页 |
| 3.1.2 连接好的质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第39-40页 |
| 3.1.3 大肠杆菌转化体的保存 | 第40页 |
| 3.1.4 目的基因(cyp105d7)的表达 | 第40页 |
| 3.1.5 SDS-PAGE检测CYP105D7的表达 | 第40-41页 |
| 3.2 CYP105D7的大量表达和纯化 | 第41-43页 |
| 3.2.1 采用FPLC快速蛋白纯化色谱仪进行蛋白质纯化 | 第42页 |
| 3.2.2 采用恒流泵进行蛋白质纯化的流程图 | 第42-43页 |
| 3.3 CO结合差光谱分析 | 第43-45页 |
| 3.3.1 CYP105D7浓度的测定 | 第43-44页 |
| 3.3.2 底物和CYP105D7的亲和力测定 | 第44-45页 |
| 3.4 美伐他汀的开环实验 | 第45页 |
| 3.5 基于全细胞催化的生物转化实验 | 第45-46页 |
| 3.6 CYP105D7的体外转化实验 | 第46页 |
| 3.7 二氢黄酮转化产物的HPLC和LC-MS分析 | 第46-47页 |
| 3.8 柚皮素、美伐他汀与CYP105D7的分子模拟 | 第47-48页 |
| 4 研究结果及讨论 | 第48-66页 |
| 4.1 纯化蛋白的SDS-PAGE实验结果 | 第48-49页 |
| 4.2 CYP105D7的紫外吸收光谱 | 第49-50页 |
| 4.3 柚皮素、松鼠素的紫外吸收差光谱分析 | 第50-53页 |
| 4.4 柚皮素的生物转化的HPLC分析和LC-MS分析结果 | 第53-55页 |
| 4.4.1 CYP105D7在体外对柚皮素的催化 | 第53-54页 |
| 4.4.2 基于全细胞的柚皮素生物转化 | 第54-55页 |
| 4.5 CYP105D7对松鼠素的生物转化的HPLC和LC-MS分析 | 第55-56页 |
| 4.6 柚皮素与CYP105D7的分子模拟 | 第56-57页 |
| 4.7 二氢黄酮的生物转化结果讨论 | 第57-58页 |
| 4.8 CYP105D7对美伐他汀的生物转化 | 第58-63页 |
| 4.8.1 美伐他汀的紫外吸收差光谱分析 | 第58-60页 |
| 4.8.2 CYP105D7在体外对美伐他汀的生物转化 | 第60-62页 |
| 4.8.3 基于全细胞的美伐他汀的生物转化 | 第62-63页 |
| 4.9 美伐他汀与CYP105D7的分子模拟 | 第63-64页 |
| 4.10 美伐他汀的生物转化结果讨论 | 第64-66页 |
| 5 结论 | 第66-69页 |
| 5.1 研究结论 | 第66-67页 |
| 5.2 本论文创新点 | 第67页 |
| 5.3 展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 作者简历 | 第78-79页 |
| 附录 | 第79-80页 |
