| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-18页 |
| 1 非酒精性脂肪肝 | 第12页 |
| 2 鹅肥肝的生产及其作为NAFLD研究模型的特点 | 第12-13页 |
| 3 非酒精脂肪肝形成机制方面的研究进展 | 第13-15页 |
| 3.1 哺乳动物NAFLD形成机制研究进展 | 第13页 |
| 3.2 鹅肥肝形成机制研究进展 | 第13-15页 |
| 4 脂联素、脂联素受体及其与脂毒性、炎症的关系 | 第15-16页 |
| 4.1 脂联素 | 第15-16页 |
| 4.2 脂联素受体 | 第16页 |
| 4.3 脂联素、脂联素受体与脂毒性、炎症的关系 | 第16页 |
| 5 本研究的立题依据及研究目的与意义 | 第16-18页 |
| 第二章 鹅脂联素受体的克隆与生物信息学分析 | 第18-30页 |
| 1 引言 | 第18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-23页 |
| 2.1 实验动物及饲养管理 | 第18页 |
| 2.2 主要实验仪器设备 | 第18-19页 |
| 2.3 主要药品及相关试剂的配制 | 第19-20页 |
| 2.3.1 常用试剂 | 第19页 |
| 2.3.2 相关试剂的配制 | 第19-20页 |
| 2.4 实验方法 | 第20-23页 |
| 2.4.1 总RNA提取的准备工作 | 第20页 |
| 2.4.2 总RNA提取 | 第20-21页 |
| 2.4.3 脂联素受体2基因的克隆 | 第21-23页 |
| 3 结果与分析 | 第23-30页 |
| 3.1 Adipor1/2基因克隆测序 | 第23-26页 |
| 3.2 Adipor1/2基因序列同源性分析 | 第26页 |
| 3.3 Adipor1/2基因分子进化树的构建 | 第26-28页 |
| 3.4 Adipor1/2基因的蛋白质特性及其结构分析 | 第28页 |
| 3.5 Adipor1/2基因蛋白质序列的结构分析 | 第28-30页 |
| 第三章 鹅TNFα、脂联素及其受体在肥肝形成中的表达 | 第30-38页 |
| 1 引言 | 第30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-35页 |
| 2.1 主要实验仪器设备 | 第30页 |
| 2.2 主要实验试剂 | 第30页 |
| 2.3 荧光定量PCR技术 | 第30-31页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第30-31页 |
| 2.3.2 获取cDNA | 第31页 |
| 2.3.3 实时荧光定量PCR反应体系(20uL)及反应条件 | 第31页 |
| 2.3.4 数据分析 | 第31页 |
| 2.4 蛋白免疫印迹技术 | 第31-35页 |
| 2.4.1 Western bolt相关试剂的配制 | 第32-33页 |
| 2.4.2 Western bolt操作步骤 | 第33-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-38页 |
| 3.1 填饲19天对朗德鹅肝脏Tnfα mRNA水平的影响 | 第35页 |
| 3.2 填饲19天对朗德鹅肝脏、腹脂Adiponectin mRNA水平的影响 | 第35-36页 |
| 3.3 填饲19天对朗德鹅肝脏Adipor1、Adipor2表达量的影响 | 第36-38页 |
| 第四章 鹅肥肝形成相关因子对脂联素受体表达的影响 | 第38-43页 |
| 1 引言 | 第38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-41页 |
| 2.1 主要仪器设备 | 第38页 |
| 2.2 鹅胚原代肝细胞的分离与培养 | 第38-39页 |
| 2.3 主要试剂配制 | 第39-40页 |
| 2.3.1 葡萄糖、油酸、棕榈酸和胰岛素等肥肝形成相关因素配制 | 第39-40页 |
| 2.3.2 鹅原代肝细胞培养相关试剂 | 第40页 |
| 2.4 细胞RNA提取 | 第40-41页 |
| 2.5 RT-PCR及qRT-PCR | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-43页 |
| 3.1 肥肝形成相关因素对鹅原代肝细胞中Adipor1、Adipor2 mRNA水平的影响 | 第41-43页 |
| 第五章 脂联素受体2的表达调控研究 | 第43-57页 |
| 1 引言 | 第43页 |
| 2 材料与方法 | 第43-53页 |
| 2.1 主要仪器设备 | 第43页 |
| 2.2 主要实验试剂及试剂盒 | 第43页 |
| 2.3 主要试剂配制 | 第43-45页 |
| 2.3.1 TBHQ处理液配制 | 第43-44页 |
| 2.3.2 血液DNA提取的相关试剂配制 | 第44页 |
| 2.3.3 琼脂糖凝胶电泳及克隆相关试剂配制相关试剂 | 第44页 |
| 2.3.4 CHO细胞培养相关试剂 | 第44-45页 |
| 2.4 双荧光酶检测试剂配制 | 第45页 |
| 2.5 扩增脂联素CDS前935bp及预测其转录因子 | 第45-46页 |
| 2.5.1 扩增脂联素CDS前935bp | 第45-46页 |
| 2.5.2 预测脂联素受体2上游转录因子 | 第46页 |
| 2.6 特丁基对苯二酚处理鹅原代肝细胞 | 第46页 |
| 2.6.1 鹅原代肝细胞的分离培养 | 第46页 |
| 2.6.2 TBHQ处理鹅原代肝细胞 | 第46页 |
| 2.6.3 细胞RNA提取、RT-PCR及qRT-PCR | 第46页 |
| 2.7 脂联素受体2部分3'UTR区序列的载体构建 | 第46-50页 |
| 2.7.1 朗德鹅血细胞DNA提取 | 第46-47页 |
| 2.7.2 引物设计及测序 | 第47页 |
| 2.7.3 靶向miRNA预测 | 第47-48页 |
| 2.7.4 pMIR-REPORT和PhRL-TK扩繁 | 第48页 |
| 2.7.5 载体质粒回收 | 第48页 |
| 2.7.6 回收PCR产物及载体双酶切 | 第48-49页 |
| 2.7.7 酶切产物连接 | 第49页 |
| 2.7.8 连接产物转化及测序鉴定 | 第49页 |
| 2.7.9 转染用质粒提取 | 第49-50页 |
| 2.8 miRNA反转录及荧光定量PCR | 第50-52页 |
| 2.8.1 miRNA反转录 | 第50-51页 |
| 2.8.2 miRNA的荧光定量PCR | 第51-52页 |
| 2.9 CHO细胞的复苏、培养、传代及冻存 | 第52页 |
| 2.10 CHO细胞的转染 | 第52-53页 |
| 2.11 双荧光素酶活性检测 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-57页 |
| 3.1 TBHQ处理鹅原代肝细胞对Adipor2 mRNA水平表达的影响 | 第53-54页 |
| 3.2 朗德鹅Adipor2与miR-19a靶向关系验证 | 第54-57页 |
| 3.2.1 Adipor2靶向miRNA预测结果 | 第54-55页 |
| 3.2.2 miR-19a在鹅肥肝中的表达规律 | 第55页 |
| 3.2.3 朗德鹅Adipor2部分3'UTR序列扩增及载体的构建 | 第55-56页 |
| 3.2.4 Adipor2与miR-19a靶向关系验证 | 第56-57页 |
| 第六章 讨论与结论 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间发表学术论文目录 | 第66-67页 |
