| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-34页 |
| 1.1 斑马鱼模式生物及优势 | 第15-16页 |
| 1.2 斑马鱼发育过程 | 第16-17页 |
| 1.3 斑马鱼基因组研究 | 第17-18页 |
| 1.4 斑马鱼突变体的筛选方法 | 第18-22页 |
| 1.4.1 物理方法诱变 | 第18页 |
| 1.4.2 化学试剂诱变方法 | 第18-20页 |
| 1.4.3 T-DNA插入筛选 | 第20-22页 |
| 1.5 转座子研究 | 第22-27页 |
| 1.5.1 Sleeping Beauty转座子 | 第22-23页 |
| 1.5.2 Tol2转座子的研究 | 第23-27页 |
| 1.6 四环素诱导系统 | 第27-30页 |
| 1.6.1 四环素诱导系统调控的机理 | 第28页 |
| 1.6.2 Tet-on系统 | 第28-29页 |
| 1.6.3 Tet-On3G诱导表达系统 | 第29-30页 |
| 1.7 T-DNA插入位点的鉴定 | 第30-31页 |
| 1.8 绝缘子(insulator) | 第31-32页 |
| 1.9 本课题目的和意义 | 第32-34页 |
| 第二章 材料和方法 | 第34-56页 |
| 2.1 斑马鱼 | 第34页 |
| 2.1.1 斑马鱼品种及饲养 | 第34页 |
| 2.1.2 斑马鱼交配及受精卵的收取 | 第34页 |
| 2.2 感受态菌株 | 第34页 |
| 2.3 抗体 | 第34页 |
| 2.4 质粒载体 | 第34-35页 |
| 2.5 Morpholoinos | 第35页 |
| 2.6 斑马鱼显微注射实验 | 第35-36页 |
| 2.7 突变体的诱导实验 | 第36页 |
| 2.8 阿尔新蓝染色 | 第36页 |
| 2.9 DNA相关实验 | 第36-42页 |
| 2.9.1 斑马鱼胚胎时期基因组简单的获得 | 第36页 |
| 2.9.2 聚合酶链式反应(PCR) | 第36-37页 |
| 2.9.3 PCR产物纯化 | 第37页 |
| 2.9.4 克隆 | 第37-39页 |
| 2.9.5 高质量成鱼基因组的提取 | 第39页 |
| 2.9.6 DNA免疫印迹 | 第39-42页 |
| 2.10 RNA相关实验 | 第42-45页 |
| 2.10.1 总RNA提取 | 第42页 |
| 2.10.2 DNaseI处理RNA | 第42-43页 |
| 2.10.3 DNaseI处理后的纯化 | 第43页 |
| 2.10.4 逆转录 | 第43页 |
| 2.10.5 反义RNA检测逆转录 | 第43页 |
| 2.10.6 mRNA体外合成 | 第43页 |
| 2.10.7 转录后的纯化 | 第43-44页 |
| 2.10.8 原位杂交探针的体外合成 | 第44页 |
| 2.10.9 整胚原位杂交(Whole mount in situ hybridization) | 第44-45页 |
| 2.11 蛋白质相关实验操作 | 第45-47页 |
| 2.11.1 斑马鱼胚胎蛋白提取 | 第45-46页 |
| 2.11.2 斑马鱼成鱼蛋白提取 | 第46页 |
| 2.11.3 蛋白免疫印迹 | 第46-47页 |
| 2.11.4 转膜 | 第47页 |
| 2.11.5 目的蛋白信号的检测 | 第47页 |
| 2.12 常用的溶液及培养基 | 第47-49页 |
| 2.13 本课题所用引物、Morpholinos序列 | 第49-56页 |
| 第三章 可诱导显性突变体筛选体系设计原理及筛选体系的建立 | 第56-63页 |
| 3.1 四环素诱导筛选突变体的原理 | 第56-57页 |
| 3.2 筛选系统的建立 | 第57-58页 |
| 3.3 诱导系统的测试 | 第58页 |
| 3.4 诱导系统的优化 | 第58-61页 |
| 3.5 转基因群体的构建 | 第61-62页 |
| 3.6 小结与结论 | 第62-63页 |
| 第四章 突变体的筛选 | 第63-67页 |
| 4.1 突变体筛选方法 | 第63-66页 |
| 4.2 小结与结论 | 第66-67页 |
| 第五章 单插入引起基因下调突变体 | 第67-85页 |
| 5.1 faf1影响斑马鱼咽弓软骨的发育 | 第67-71页 |
| 5.2 grb14下调引起斑马鱼胚胎身体弯曲 | 第71-75页 |
| 5.3 pcyt1aa丧失功能引起眼睛发育受阻及脑出血 | 第75-78页 |
| 5.4 nidogen2基因失活可引起斑马鱼身体短小,局部出血表型 | 第78-81页 |
| 5.5 ap2b1基因水平下调引起发育崎形甚至死亡 | 第81-82页 |
| 5.6 sgcd基因下调引起心肌骨骼肌失调 | 第82-83页 |
| 5.7 小结与结论 | 第83-85页 |
| 第六章 单插入诱导基因过表达突交体 | 第85-89页 |
| 6.1 Loc556929过表达引起身体弯曲 | 第85-86页 |
| 6.2 plcd1a过表达引起身体弯曲,眼睛、脑发育受阻 | 第86-87页 |
| 6.3 小结与结论 | 第87-89页 |
| 第七章 多转座子插入诱导特异性表型突变体 | 第89-109页 |
| 7.1 TISA28品系 | 第89-90页 |
| 7.2 TISE22品系 | 第90-92页 |
| 7.3 TISA20品系 | 第92-93页 |
| 7.4 TISE54品系 | 第93-94页 |
| 7.5 TISE19品系 | 第94-95页 |
| 7.6 TISE1品系 | 第95-97页 |
| 7.7 TISE14品系 | 第97-99页 |
| 7.8 TISE46品系 | 第99-101页 |
| 7.9 TISA96品系 | 第101-102页 |
| 7.10 TISE256品系 | 第102-104页 |
| 7.11 TISA199品系 | 第104-105页 |
| 7.12 TISA33品系 | 第105-106页 |
| 7.13 小结与结论 | 第106-109页 |
| 第八章 多转座子插入诱导非特异性表型突变体 | 第109-116页 |
| 8.1 TISE6品系 | 第109-110页 |
| 8.2 TISE55品系 | 第110-112页 |
| 8.3 TISA31品系 | 第112-113页 |
| 8.4 TISE43品系 | 第113-115页 |
| 8.5 小结与结论 | 第115-116页 |
| 第九章 无表型转基因鱼基因表达分析 | 第116-123页 |
| 9.1 胚胎期无表型转基因斑马鱼转座子插入信息 | 第116-117页 |
| 9.2 部分基因上调转基因品系 | 第117-119页 |
| 9.2.1 nsmce1过表达转基因鱼 | 第117-118页 |
| 9.2.2 1hfp14a过表达转基因鱼 | 第118-119页 |
| 9.2.3 s1c3a2过表达转基因鱼 | 第119页 |
| 9.3 基因下调转基因品系 | 第119-121页 |
| 9.3.1 sfswap基因下调转基因品系 | 第119-120页 |
| 9.3.2 itcha基因下调转基因品系 | 第120-121页 |
| 9.4 基因表达无变化转基因鱼 | 第121页 |
| 9.5 小结与结论 | 第121-123页 |
| 第十章 结论与讨论 | 第123-127页 |
| 10.1 结论 | 第123页 |
| 10.2 讨论 | 第123-127页 |
| 参考文献 | 第127-131页 |
| 作者简介 | 第131-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
