| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 前言与综述 | 第12-18页 |
| 1.1 药物转运体的意义 | 第12-15页 |
| 1.1.1 肾脏OATs | 第13-15页 |
| 1.1.1.1 有机阴离子转运体1(OAT1) | 第13-14页 |
| 1.1.1.2 有机阴离子转运体(OAT2) | 第14-15页 |
| 1.1.1.3 有机阴离子转运体(OAT3) | 第15页 |
| 1.1.1.4 有机阴离子转运体(OAT4) | 第15页 |
| 1.2 黄酮类化合物与转运蛋白相互作用研究现状 | 第15-16页 |
| 1.3 芹菜素与转运体相互作用研究现状 | 第16-17页 |
| 1.4 论文的主要研究内容 | 第17页 |
| 1.5 本论文的目的及意义 | 第17-18页 |
| 第二章 稳定表达hOAT1的细胞株的构建与鉴定 | 第18-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 主要实验仪器 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂及耗材 | 第18-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-25页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第20页 |
| 2.2.2 表达SLC22A6基因的慢病毒的构建 | 第20页 |
| 2.2.3 细胞G418最低致死浓度的测定 | 第20-21页 |
| 2.2.4 慢病毒感染与G418筛选 | 第21页 |
| 2.2.5 RT-qPCR检测稳转株hOAT1 mRNA表达 | 第21-23页 |
| 2.2.6 Western blot法检测稳转株与对照株hOAT1蛋白的表达 | 第23-25页 |
| 2.3 实验结果 | 第25-29页 |
| 2.3.1 慢病毒表达质粒(含SLC22A6片段)的构建 | 第25-26页 |
| 2.3.2 稳转细胞筛选结果 | 第26-27页 |
| 2.3.3 Real-Time PCR检测稳转株mRNA表达 | 第27-29页 |
| 2.3.4 Western blot检测hOAT1蛋白表达 | 第29页 |
| 2.4 实验小结 | 第29-31页 |
| 第三章 6-CFL摄取实验 | 第31-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 主要实验仪器 | 第31页 |
| 3.1.2 主要试剂及耗材 | 第31-32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-35页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第32页 |
| 3.2.2 6-CFL标准曲线的建立 | 第32-33页 |
| 3.2.3 6-CFL吸收缓冲液及药物的配制 | 第33页 |
| 3.2.4 OAT1稳转株的功能鉴定 | 第33-34页 |
| 3.2.5 中药单体对OAT1抑制活性的初步测定 | 第34页 |
| 3.2.6 中药单体抑制OAT1 IC_(50)的测定 | 第34页 |
| 3.2.7 抑制剂预孵育对OAT1摄取6-CFL能力的影响 | 第34-35页 |
| 3.2.8 统计学分析 | 第35页 |
| 3.3 实验结果 | 第35-42页 |
| 3.3.1 6-CFL标准曲线的建立 | 第35-36页 |
| 3.3.2 OAT1稳转株摄取6-CFL的能力 | 第36-37页 |
| 3.3.3 化合物抑制OAT1活性的初步测定 | 第37-39页 |
| 3.3.4 化合物抑制OAT1 IC_(50)的测定 | 第39-40页 |
| 3.3.5 预孵育增强芹菜素对hOAT1的抑制活性 | 第40-42页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第42-43页 |
| 第四章 OAT1介导的芹菜素-阿昔洛韦相互作用研究 | 第43-58页 |
| 4.1 实验仪器与材料 | 第43-44页 |
| 4.1.1 主要仪器设备 | 第43页 |
| 4.1.2 主要试剂及耗材 | 第43-44页 |
| 4.1.3 细胞培养 | 第44页 |
| 4.1.4 实验动物 | 第44页 |
| 4.1.5 药物配制 | 第44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-49页 |
| 4.2.1 芹菜素在MDCK-hOAT1细胞中的积聚 | 第44-45页 |
| 4.2.2 芹菜素对MDCK-hOAT1细胞摄取阿昔洛韦的影响 | 第45页 |
| 4.2.3 芹菜素对大鼠血浆阿昔洛韦药物浓度的影响 | 第45-46页 |
| 4.2.4 UPLC-MS/MS检测芹菜素、阿昔洛韦的浓度 | 第46-48页 |
| 4.2.5 数据分析 | 第48-49页 |
| 4.3 实验结果 | 第49-56页 |
| 4.3.1 方法学验证结果 | 第49-52页 |
| 4.3.2 芹菜素不是hOAT1的底物 | 第52页 |
| 4.3.3 芹菜素抑制MDCK-hOAT1对阿昔洛韦的摄取 | 第52-53页 |
| 4.3.4 芹菜素能增加大鼠血浆中阿昔洛韦的浓度 | 第53-56页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 芹菜素降低阿德福韦所致细胞毒性 | 第58-63页 |
| 5.1 实验材料 | 第58-59页 |
| 5.1.1 主要实验仪器 | 第58页 |
| 5.1.2 主要试剂及耗材 | 第58-59页 |
| 5.2 实验方法 | 第59-60页 |
| 5.2.1 细胞培养 | 第59页 |
| 5.2.2 药物配制 | 第59页 |
| 5.2.3 MTT实验 | 第59-60页 |
| 5.3 实验结果 | 第60-62页 |
| 5.3.1 芹菜素对MDCK-mock及MDCK-hOAT1细胞活力的影响 | 第60页 |
| 5.3.2 阿德福韦对MDCK-mock及MDCK-hOAT1细胞活力的影响 | 第60-61页 |
| 5.3.3 芹菜素降低阿德福韦对MDCK-hOAT1的细胞毒性 | 第61-62页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第62-63页 |
| 全文结果总结 | 第63-66页 |
| 讨论 | 第66-69页 |
| 全文结论 | 第69-70页 |
| 创新性及展望 | 第70-71页 |
| 附录 | 第71-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 主要缩略词中英文对照表 | 第81-83页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
