摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-7页 |
一. 研究背景 | 第11-13页 |
二. 实验材料 | 第13-17页 |
2.1 细胞株 | 第13-14页 |
2.2 Oligonucleotides | 第14-15页 |
2.3 慢病毒表达载体 | 第15页 |
2.4 荧光素酶报告基因载体 | 第15-16页 |
2.5 乳腺癌临床标本 | 第16-17页 |
三. 实验试剂与设备 | 第17-20页 |
3.1 药品与试剂 | 第17-19页 |
3.2 材料与设备 | 第19-20页 |
四. 实验方法 | 第20-47页 |
4.1 MTT检测细胞增殖 | 第20页 |
4.2 MicroRNA芯片 | 第20-22页 |
4.3 细胞凋亡 | 第22-23页 |
4.4 细胞周期 | 第23页 |
4.5 划痕检测细胞迁移 | 第23页 |
4.6 Transwell检测细胞侵袭 | 第23-24页 |
4.7 平板克隆形成实验 | 第24-25页 |
4.8 转染 | 第25-26页 |
4.9 慢病毒转染 | 第26-28页 |
4.10 稳定表达细胞的筛选 | 第28-29页 |
4.11 蛋白质的提取 | 第29页 |
4.12 BCA蛋白含量测定 | 第29-30页 |
4.13 蛋白质免疫印迹 | 第30-33页 |
4.14 RNA提取 | 第33-35页 |
4.15 实时荧光定量PCR | 第35-36页 |
4.16 双荧光素酶试验 | 第36-41页 |
4.17 免疫荧光染色 | 第41-42页 |
4.18 免疫组织化学 | 第42-43页 |
4.19 MicroRNA荧光原位杂交 | 第43-46页 |
4.20 小鼠皮下转移瘤模型 | 第46页 |
4.21 统计学分析 | 第46-47页 |
五. 实验结果 | 第47-80页 |
5.1 卡铂加吉西他滨联合PARP抑制剂上调miR-664b-5p的表达 | 第47-51页 |
5.2 miR-664b-5p过表达抑制细胞生长,迁移和侵袭 | 第51-56页 |
5.3 CCNE2是miR-66b-5下游的直接靶基因 | 第56-65页 |
5.4 CCNE2敲除与观察到的异常miR-664b-5p表达效应相似 | 第65-71页 |
5.5 miR-664b-5p对体内肿瘤生长的影响 | 第71-80页 |
六. 讨论 | 第80-84页 |
参考文献 | 第84-92页 |
综述一 | 第92-114页 |
参考文献 | 第104-114页 |
综述二 | 第114-125页 |
参考文献 | 第118-125页 |
攻读博士期间发表的论文 | 第125-127页 |
致谢 | 第127-128页 |