英文缩略词表 | 第4-10页 |
中文摘要 | 第10-12页 |
Abstract | 第12-13页 |
1 前言 | 第15-25页 |
1.1 抗氧化系统的基础概念 | 第15-21页 |
1.1.1 氧自由基相关理论 | 第15-16页 |
1.1.2 机体抗氧化系统 | 第16-20页 |
1.1.2.1 抗氧化酶系统 | 第16-19页 |
1.1.2.2 抗氧化物系统 | 第19-20页 |
1.1.3 氧化应激 | 第20-21页 |
1.2 氧化应激相关信号通路 | 第21-24页 |
1.2.1 Nrf2 | 第21-22页 |
1.2.2 Keap1 | 第22页 |
1.2.3 抗氧化反应元件 | 第22-23页 |
1.2.4 Nrf2信号通路的激活 | 第23-24页 |
1.3 本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
2 材料与方法 | 第25-46页 |
2.1 试验动物管理 | 第25页 |
2.2 试验鸡胚 | 第25页 |
2.3 试验细胞系 | 第25页 |
2.4 试验试剂与主要仪器 | 第25-30页 |
2.5 试验设计 | 第30-33页 |
2.5.1 肉鸡肠道抗氧化酶系统的时空表达规律 | 第30-31页 |
2.5.1.1 试验处理 | 第30页 |
2.5.1.2 样品采集 | 第30-31页 |
2.5.1.3 测定指标 | 第31页 |
2.5.2 不同吸收效率肉鸡肠道抗氧化系统分析 | 第31-32页 |
2.5.2.1 试验处理 | 第31页 |
2.5.2.2 样品采集 | 第31页 |
2.5.2.3 测定指标 | 第31-32页 |
2.5.3 鸡肠上皮细胞的分离、培养与鉴定 | 第32页 |
2.5.3.1 试验处理 | 第32页 |
2.5.3.2 样品采集 | 第32页 |
2.5.3.3 测定指标 | 第32页 |
2.5.4 氧化应激对肠上皮细胞的影响 | 第32-33页 |
2.6 试验方法 | 第33-45页 |
2.6.1 细胞培养和检测 | 第33-36页 |
2.6.1.1 原代鸡肠上皮细胞培养 | 第33页 |
2.6.1.2 原代鸡胚成纤维细胞培养 | 第33-34页 |
2.6.1.3 细胞系的培养 | 第34页 |
2.6.1.4 上皮细胞H.E染色 | 第34页 |
2.6.1.5 上皮细胞吉姆萨染色 | 第34-35页 |
2.6.1.6 细胞荧光免疫 | 第35页 |
2.6.1.7 肠上皮细胞活力测定 | 第35页 |
2.6.1.8 肠上皮细胞扫描电镜 | 第35-36页 |
2.6.1.9 肠上皮细胞透射电镜 | 第36页 |
2.6.2 肠道组织形态学观察检测 | 第36-37页 |
2.6.2.1 肠道组织H.E染色观察 | 第36页 |
2.6.2.2 肠道组织抗氧化酶免疫组化检测 | 第36-37页 |
2.6.3 MDA检测方法 | 第37-38页 |
2.6.3.1 血清MDA检测 | 第37-38页 |
2.6.3.2 组织和细胞MDA检测 | 第38页 |
2.6.4 mRNA表达水平检测 | 第38-44页 |
2.6.4.1 总RNA提取 | 第38-39页 |
2.6.4.1.1 组织中总RNA提取 | 第38-39页 |
2.6.4.1.2 肠上皮细胞中总RNA提取 | 第39页 |
2.6.4.2 总RNA浓度测定 | 第39页 |
2.6.4.3 总RNA琼脂糖凝胶电泳 | 第39-40页 |
2.6.4.4 总RNA反转录 | 第40页 |
2.6.4.5 荧光定量 PCR | 第40-44页 |
2.6.5 蛋白提取和Western Blotting | 第44-45页 |
2.6.5.1 细胞蛋白提取 | 第44页 |
2.6.5.2 蛋白浓度测定 | 第44页 |
2.6.5.3 蛋白变性 | 第44页 |
2.6.5.4 Western Blotting | 第44-45页 |
2.6.6 抗氧化酶系统测定方法 | 第45页 |
2.7 数据处理 | 第45-46页 |
3 结果与分析 | 第46-74页 |
3.1 肉鸡肠道抗氧化酶系统的时空表达规律 | 第46-57页 |
3.1.1 肉鸡相同日龄各组织抗氧化酶活性变化规律 | 第46-48页 |
3.1.2 肉鸡不同日龄肠道抗氧化酶表达变化规律 | 第48-51页 |
3.1.3 肉鸡不同日龄肠道抗氧化酶免疫组化变化 | 第51-53页 |
3.1.4 肉鸡肠道不同部位抗氧化酶表达规律 | 第53-57页 |
3.2 不同吸收效率肉鸡肠道抗氧化酶系统分析 | 第57-61页 |
3.2.1 D-木糖吸收测试筛选结果 | 第57-58页 |
3.2.2 不同吸收效率肉鸡血清和肠道抗氧化酶系统比较 | 第58-60页 |
3.2.3 不同吸收效率肉鸡肠道形态结构比较 | 第60页 |
3.2.4 不同吸收效率肉鸡肠道转运载体表达量比较 | 第60-61页 |
3.3 鸡肠上皮细胞的分离、培养及鉴定 | 第61-67页 |
3.3.1 鸡肠上皮细胞的分离 | 第61-62页 |
3.3.2 鸡肠上皮细胞的培养与鉴定 | 第62-67页 |
3.3.2.1 鸡肠上皮细胞普通形态鉴定 | 第62-64页 |
3.3.2.2 鸡肠上皮细胞微观结构鉴定 | 第64-65页 |
3.3.2.3 鸡肠上皮细胞特异蛋白鉴定 | 第65-67页 |
3.4 氧化应激对肠上皮细胞的影响 | 第67-74页 |
3.4.1 过氧化氢对肠上皮细胞活性的影响 | 第67页 |
3.4.2 氧化应激对肠上皮细胞形态的影响 | 第67-69页 |
3.4.3 氧化应激对肠上皮细胞抗氧化系统表达的影响 | 第69-70页 |
3.4.4 氧化应激对肠上皮细胞抗氧化系统调控的影响 | 第70-74页 |
4 讨论 | 第74-86页 |
4.1 肉鸡肠道抗氧化酶的时空表达规律 | 第74-77页 |
4.1.1 肉鸡相同日龄各组织抗氧化酶活性变化规律 | 第74-75页 |
4.1.2 肉鸡肠道抗氧化酶系统表达变化规律 | 第75-76页 |
4.1.3 肉鸡肠道不同部位抗氧化酶变化规律 | 第76-77页 |
4.2 不同吸收效率肉鸡肠道抗氧化酶系统分析 | 第77-81页 |
4.2.1 D-木糖吸收试验 | 第77-78页 |
4.2.2 不同吸收效率对肉鸡肠道形态结构的影响 | 第78页 |
4.2.3 不同吸收效率对肉鸡肠道转运载体表达量的影响 | 第78-80页 |
4.2.4 不同吸收效率对肉鸡血清和肠道抗氧化酶系统的影响 | 第80-81页 |
4.3 鸡肠上皮细胞的分离、培养及鉴定 | 第81-84页 |
4.3.1 鸡肠上皮细胞的分离 | 第81-83页 |
4.3.2 鸡肠上皮细胞的培养与鉴定 | 第83-84页 |
4.3.2.1 鸡肠上皮细胞形态鉴定 | 第83页 |
4.3.2.2 鸡肠上皮细胞特异蛋白表达 | 第83-84页 |
4.4 氧化应激对肠上皮细胞的影响 | 第84-86页 |
4.4.1 氧化应激对肠上皮细胞活性的影响 | 第84-85页 |
4.4.2 氧化应激对肠上皮细胞形态的影响 | 第85页 |
4.4.3 氧化应激对肠上皮细胞抗氧化系统表达的影响 | 第85页 |
4.4.4 氧化应激对肠上皮细胞抗氧化系统调控的影响 | 第85-86页 |
5 总体结论 | 第86-87页 |
6.创新点和展望 | 第87-88页 |
6.1 创新点 | 第87页 |
6.2 展望 | 第87-88页 |
参考文献 | 第88-107页 |
致谢 | 第107页 |