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肉鸡肠上皮细胞抗氧化酶系统表达和调控研究

英文缩略词表第4-10页
中文摘要第10-12页
Abstract第12-13页
1 前言第15-25页
    1.1 抗氧化系统的基础概念第15-21页
        1.1.1 氧自由基相关理论第15-16页
        1.1.2 机体抗氧化系统第16-20页
            1.1.2.1 抗氧化酶系统第16-19页
            1.1.2.2 抗氧化物系统第19-20页
        1.1.3 氧化应激第20-21页
    1.2 氧化应激相关信号通路第21-24页
        1.2.1 Nrf2第21-22页
        1.2.2 Keap1第22页
        1.2.3 抗氧化反应元件第22-23页
        1.2.4 Nrf2信号通路的激活第23-24页
    1.3 本研究的目的和意义第24-25页
2 材料与方法第25-46页
    2.1 试验动物管理第25页
    2.2 试验鸡胚第25页
    2.3 试验细胞系第25页
    2.4 试验试剂与主要仪器第25-30页
    2.5 试验设计第30-33页
        2.5.1 肉鸡肠道抗氧化酶系统的时空表达规律第30-31页
            2.5.1.1 试验处理第30页
            2.5.1.2 样品采集第30-31页
            2.5.1.3 测定指标第31页
        2.5.2 不同吸收效率肉鸡肠道抗氧化系统分析第31-32页
            2.5.2.1 试验处理第31页
            2.5.2.2 样品采集第31页
            2.5.2.3 测定指标第31-32页
        2.5.3 鸡肠上皮细胞的分离、培养与鉴定第32页
            2.5.3.1 试验处理第32页
            2.5.3.2 样品采集第32页
            2.5.3.3 测定指标第32页
        2.5.4 氧化应激对肠上皮细胞的影响第32-33页
    2.6 试验方法第33-45页
        2.6.1 细胞培养和检测第33-36页
            2.6.1.1 原代鸡肠上皮细胞培养第33页
            2.6.1.2 原代鸡胚成纤维细胞培养第33-34页
            2.6.1.3 细胞系的培养第34页
            2.6.1.4 上皮细胞H.E染色第34页
            2.6.1.5 上皮细胞吉姆萨染色第34-35页
            2.6.1.6 细胞荧光免疫第35页
            2.6.1.7 肠上皮细胞活力测定第35页
            2.6.1.8 肠上皮细胞扫描电镜第35-36页
            2.6.1.9 肠上皮细胞透射电镜第36页
        2.6.2 肠道组织形态学观察检测第36-37页
            2.6.2.1 肠道组织H.E染色观察第36页
            2.6.2.2 肠道组织抗氧化酶免疫组化检测第36-37页
        2.6.3 MDA检测方法第37-38页
            2.6.3.1 血清MDA检测第37-38页
            2.6.3.2 组织和细胞MDA检测第38页
        2.6.4 mRNA表达水平检测第38-44页
            2.6.4.1 总RNA提取第38-39页
                2.6.4.1.1 组织中总RNA提取第38-39页
                2.6.4.1.2 肠上皮细胞中总RNA提取第39页
            2.6.4.2 总RNA浓度测定第39页
            2.6.4.3 总RNA琼脂糖凝胶电泳第39-40页
            2.6.4.4 总RNA反转录第40页
            2.6.4.5 荧光定量 PCR第40-44页
        2.6.5 蛋白提取和Western Blotting第44-45页
            2.6.5.1 细胞蛋白提取第44页
            2.6.5.2 蛋白浓度测定第44页
            2.6.5.3 蛋白变性第44页
            2.6.5.4 Western Blotting第44-45页
        2.6.6 抗氧化酶系统测定方法第45页
    2.7 数据处理第45-46页
3 结果与分析第46-74页
    3.1 肉鸡肠道抗氧化酶系统的时空表达规律第46-57页
        3.1.1 肉鸡相同日龄各组织抗氧化酶活性变化规律第46-48页
        3.1.2 肉鸡不同日龄肠道抗氧化酶表达变化规律第48-51页
        3.1.3 肉鸡不同日龄肠道抗氧化酶免疫组化变化第51-53页
        3.1.4 肉鸡肠道不同部位抗氧化酶表达规律第53-57页
    3.2 不同吸收效率肉鸡肠道抗氧化酶系统分析第57-61页
        3.2.1 D-木糖吸收测试筛选结果第57-58页
        3.2.2 不同吸收效率肉鸡血清和肠道抗氧化酶系统比较第58-60页
        3.2.3 不同吸收效率肉鸡肠道形态结构比较第60页
        3.2.4 不同吸收效率肉鸡肠道转运载体表达量比较第60-61页
    3.3 鸡肠上皮细胞的分离、培养及鉴定第61-67页
        3.3.1 鸡肠上皮细胞的分离第61-62页
        3.3.2 鸡肠上皮细胞的培养与鉴定第62-67页
            3.3.2.1 鸡肠上皮细胞普通形态鉴定第62-64页
            3.3.2.2 鸡肠上皮细胞微观结构鉴定第64-65页
            3.3.2.3 鸡肠上皮细胞特异蛋白鉴定第65-67页
    3.4 氧化应激对肠上皮细胞的影响第67-74页
        3.4.1 过氧化氢对肠上皮细胞活性的影响第67页
        3.4.2 氧化应激对肠上皮细胞形态的影响第67-69页
        3.4.3 氧化应激对肠上皮细胞抗氧化系统表达的影响第69-70页
        3.4.4 氧化应激对肠上皮细胞抗氧化系统调控的影响第70-74页
4 讨论第74-86页
    4.1 肉鸡肠道抗氧化酶的时空表达规律第74-77页
        4.1.1 肉鸡相同日龄各组织抗氧化酶活性变化规律第74-75页
        4.1.2 肉鸡肠道抗氧化酶系统表达变化规律第75-76页
        4.1.3 肉鸡肠道不同部位抗氧化酶变化规律第76-77页
    4.2 不同吸收效率肉鸡肠道抗氧化酶系统分析第77-81页
        4.2.1 D-木糖吸收试验第77-78页
        4.2.2 不同吸收效率对肉鸡肠道形态结构的影响第78页
        4.2.3 不同吸收效率对肉鸡肠道转运载体表达量的影响第78-80页
        4.2.4 不同吸收效率对肉鸡血清和肠道抗氧化酶系统的影响第80-81页
    4.3 鸡肠上皮细胞的分离、培养及鉴定第81-84页
        4.3.1 鸡肠上皮细胞的分离第81-83页
        4.3.2 鸡肠上皮细胞的培养与鉴定第83-84页
            4.3.2.1 鸡肠上皮细胞形态鉴定第83页
            4.3.2.2 鸡肠上皮细胞特异蛋白表达第83-84页
    4.4 氧化应激对肠上皮细胞的影响第84-86页
        4.4.1 氧化应激对肠上皮细胞活性的影响第84-85页
        4.4.2 氧化应激对肠上皮细胞形态的影响第85页
        4.4.3 氧化应激对肠上皮细胞抗氧化系统表达的影响第85页
        4.4.4 氧化应激对肠上皮细胞抗氧化系统调控的影响第85-86页
5 总体结论第86-87页
6.创新点和展望第87-88页
    6.1 创新点第87页
    6.2 展望第87-88页
参考文献第88-107页
致谢第107页

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