| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-15页 |
| 主要英文缩写 | 第15-16页 |
| 文献综述 | 第16-20页 |
| 引言 | 第20-21页 |
| 1 材料与方法 | 第21-37页 |
| ·材料 | 第21-24页 |
| ·样品 | 第21页 |
| ·菌株、细胞、载体和实验动物 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·LB液体培养基 | 第22页 |
| ·Amp~+/Kan~+LB液体培养基 | 第22页 |
| ·LB固体培养基 | 第22页 |
| ·Amp~+/Kan~+LB固体培养基 | 第22页 |
| ·细胞培养液 | 第22页 |
| ·电泳相关试剂 | 第22页 |
| ·大提质粒相关溶液 | 第22-23页 |
| ·蛋白诱导表达与纯化相关溶液 | 第23页 |
| ·SDS-PAGE检测相关试剂 | 第23页 |
| ·Western-blot实验相关溶液 | 第23-24页 |
| ·ELISA实验相关试剂 | 第24页 |
| ·MTS、流式细胞检测相关试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·刚地弓形虫不同分离株ROP38基因的PCR扩增、测序及序列分析 | 第25-27页 |
| ·虫体基因组DNA的提取 | 第25页 |
| ·PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·目的片段的回收 | 第26页 |
| ·连接转化 | 第26-27页 |
| ·重组质粒pMD-18T-ROP38的鉴定 | 第27页 |
| ·DNA序列分析 | 第27页 |
| ·弓形虫RH株ROP38基因序列生物信息学分析 | 第27页 |
| ·TgRO38蛋白基本理化性质分析 | 第27页 |
| ·TgRO38蛋白亲/疏水性分析 | 第27页 |
| ·TgRO38蛋白跨膜结构域分析 | 第27页 |
| ·TgRO38蛋白3D结构 | 第27页 |
| ·TgRO38蛋白抗原表位分析 | 第27页 |
| ·弓形虫RH株ROP38基因核酸疫苗免疫保护性研究 | 第27-34页 |
| ·弓形虫RH株基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增 | 第28页 |
| ·真核重组质粒和原核重组质粒的构建 | 第28-29页 |
| ·pET-ROP38原核重组质粒的表达、纯化和鉴定 | 第29-30页 |
| ·pVAX-ROP38真核重组质粒的大量提取和无内毒素提取 | 第30页 |
| ·pVAX-ROP38体外表达 | 第30-31页 |
| ·间接免疫荧光实验 | 第31页 |
| ·小鼠免疫实验 | 第31页 |
| ·弓形虫RH株和PRU株攻击感染实验 | 第31-32页 |
| ·抗体检测 | 第32页 |
| ·免疫小鼠脾细胞悬液的制备 | 第32页 |
| ·免疫小鼠T淋巴细胞增殖实验(MTS) | 第32-33页 |
| ·免疫小鼠流式细胞术实验 | 第33页 |
| ·细胞因子检测 | 第33-34页 |
| ·弓形虫棒状体蛋白38和18混合蛋白疫苗免疫保护性研究 | 第34-37页 |
| ·弓形虫RH株基因组DNA的提取 | 第34页 |
| ·PCR扩增 | 第34页 |
| ·原核重组质粒的构建 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的大量表达、纯化 | 第35页 |
| ·PLG缓释颗粒疫苗的制备 | 第35页 |
| ·缓释颗粒包封率 | 第35页 |
| ·缓释颗粒体外释放实验 | 第35-36页 |
| ·小鼠免疫实验 | 第36页 |
| ·PRU株攻击感染实验 | 第36页 |
| ·抗体检测 | 第36页 |
| ·免疫小鼠脾细胞悬液的制备 | 第36页 |
| ·免疫小鼠T淋巴细胞增殖实验(MTS) | 第36页 |
| ·免疫小鼠流式细胞术 | 第36页 |
| ·细胞因子检测 | 第36-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-53页 |
| ·弓形虫不同分离株ROP38基因的PCR扩增、克隆及序列分析 | 第37-39页 |
| ·弓形虫ROP38基因的PCR扩增结果 | 第37页 |
| ·重组质粒的鉴定结果 | 第37页 |
| ·TgROP38序列测定及分析 | 第37-39页 |
| ·RH株ROP38基因的生物信息学分析结果 | 第39-41页 |
| ·TgROP38蛋白的理化性质分析 | 第39页 |
| ·TgROP38蛋白的亲/疏水性分析 | 第39页 |
| ·TgROP38蛋白跨膜结构域和细胞内定位 | 第39-40页 |
| ·TgROP38蛋白二级和三级结构 | 第40-41页 |
| ·TgROP38蛋白抗原表位的预测 | 第41页 |
| ·pVAX-ROP38 DNA疫苗免疫保护性研究结果 | 第41-47页 |
| ·弓形虫RH株ROP38基因的扩增 | 第41页 |
| ·重组质粒表达载体pET-ROP38的构建 | 第41-42页 |
| ·目的蛋白的表达及Western-blot分析 | 第42-43页 |
| ·重组真核表达质粒pVAX-ROP38的构建 | 第43-44页 |
| ·pVAX-ROP38重组质粒的体外瞬时表达 | 第44页 |
| ·抗体检测结果 | 第44-45页 |
| ·淋巴细胞增值实验结果 | 第45页 |
| ·细胞因子检测 | 第45-46页 |
| ·流式细胞检测结果 | 第46页 |
| ·RH株攻击感染小鼠死亡时间 | 第46-47页 |
| ·PRU株攻击感染小鼠脑包囊减少率 | 第47页 |
| ·ROP38和ROP18混合蛋白疫苗缓释颗粒免疫保护性研究结果 | 第47-53页 |
| ·弓形虫ROP38和ROP18基因的扩增和pET-ROP18重组质粒的构建 | 第47-48页 |
| ·pET-ROP38、pET-ROP18表达纯化结果 | 第48页 |
| ·PLG-rROP38和PLG-rROP18缓释颗粒包封率 | 第48页 |
| ·PLG-rROP38和PLG-rROP18缓释颗粒疫苗体外释放 | 第48-49页 |
| ·抗体检测结果 | 第49-50页 |
| ·淋巴细胞增殖实验结果 | 第50页 |
| ·细胞因子检测 | 第50-51页 |
| ·流式细胞检测结果 | 第51页 |
| ·PRU株攻击感染小鼠脑包囊减少率 | 第51-53页 |
| 3 讨论 | 第53-57页 |
| ·不同弓形虫虫株ROP38序列遗传变异研究 | 第53页 |
| ·弓形虫RH株ROP38基因生物信息学分析 | 第53-54页 |
| ·抗弓形虫pVAX-ROP38 DNA疫苗的研究 | 第54-55页 |
| ·抗弓形虫ROP38、ROP18混合蛋白疫苗的研究 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简介 | 第64页 |
