| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-22页 |
| 一. 癌症的危害性以及目前癌症治疗面临的问题 | 第15-16页 |
| 二. 巨噬细胞——固有免疫中具有异质性的一类细胞 | 第16-18页 |
| 三. 肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤免疫微环境中的功能 | 第18-19页 |
| 1. 促进血管生成 | 第18页 |
| 2. 促进肿瘤的浸润与转移 | 第18-19页 |
| 3. 免疫抑制 | 第19页 |
| 四. 胞外核苷酸UDP及其受体P2Y_6具有重要的免疫调控作用 | 第19-20页 |
| 五. 本课题的目的.内容及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 P2Y_6受体表达与临床肿瘤组织相关性的分析 | 第22-33页 |
| 一. 引言 | 第22页 |
| 二. 实验材料与方法 | 第22-26页 |
| 1. 实验材料 | 第22页 |
| 2. 实验试剂与试剂盒 | 第22-23页 |
| 3. 试剂配方 | 第23页 |
| 4. 实验仪器及耗材 | 第23页 |
| 5. 实验方法 | 第23-26页 |
| ·临床肿瘤数据库简介与分析方法 | 第23-24页 |
| ·免疫组织化学技术 | 第24-25页 |
| ·数据分析 | 第25-26页 |
| 三. 实验结果 | 第26-31页 |
| 1. cBioPortal工具分析不同器官肿瘤中P2Y_6基因mRNA水平的变化 | 第26-27页 |
| 2. GENT工具分析临床肺癌组织中P2Y_6 mRNA水平相较于正常肺组织有所升高 | 第27-28页 |
| 3. Oncomine工具对不同类型肺癌组织中P2Y_6 mRNA水平的分析 | 第28-29页 |
| 4. Kaplan Meier plotter工具对P2Y_6表达量与肺癌患者生存率关系的分析 | 第29页 |
| 5. 多器官肿瘤组织芯片验证肺癌中P2Y_6基因的高表达 | 第29-30页 |
| 6. 组织中浸润有大量形态类似单核细胞样的细胞 | 第30-31页 |
| 四. 讨论与小结 | 第31-33页 |
| 第三章 P2Y_6基因在肿瘤免疫微环境中的调控作用 | 第33-47页 |
| 一. 引言 | 第33页 |
| 二. 实验材料与方法 | 第33-38页 |
| 1. 实验材料 | 第33-34页 |
| ·实验细胞 | 第33-34页 |
| ·实验动物 | 第34页 |
| 2. 实验试剂与试剂盒 | 第34页 |
| 3. 试剂配方 | 第34-35页 |
| 4. 实验仪器及耗材 | 第35页 |
| 5. 实验方法 | 第35-38页 |
| ·小鼠骨髓来源巨噬细胞的提取 | 第35-36页 |
| ·L929细胞上清的制备 | 第36页 |
| ·小鼠移植瘤模型的构建 | 第36-37页 |
| ·小鼠肿瘤与巨噬细胞共注射模型的构建 | 第37页 |
| ·流式细胞术分析小鼠肿瘤组织不同免疫细胞的比例 | 第37-38页 |
| 三. 实验结果 | 第38-45页 |
| 1. P2Y_6 WT.KO小鼠移植瘤模型的建立 | 第38-39页 |
| 2. P2Y_6敲除型小鼠肿瘤组织中巨噬细胞显著变化 | 第39-43页 |
| 3. P2Y_6缺失的巨噬细胞显著抑制肿瘤的生长 | 第43-45页 |
| 四. 讨论与小结 | 第45-47页 |
| 第四章 P2Y_6对巨噬细胞功能的调控 | 第47-73页 |
| 一. 引言 | 第47页 |
| 二. 实验材料与方法 | 第47-58页 |
| 1. 实验材料 | 第47页 |
| 2. 实验试剂与试剂盒 | 第47-48页 |
| 3. 试剂配方 | 第48-49页 |
| 4. 实验仪器及耗材 | 第49-50页 |
| 5. 本章所涉及的引物序列 | 第50-51页 |
| 6. 实验方法 | 第51-58页 |
| ·荧光偏振法检测小鼠骨髓来源巨噬细胞体外诱导分化过程中的UDP释放 | 第51-52页 |
| ·总RNA的抽提 | 第52-53页 |
| ·RNA的反转录 | 第53页 |
| ·荧光定量PCR | 第53-54页 |
| ·巨噬细胞的培养 | 第54页 |
| ·小鼠脾脏细胞的提取 | 第54-55页 |
| ·腹腔来源巨噬细胞的提取 | 第55页 |
| ·MCP-1 mRNA水平的检测 | 第55-56页 |
| ·小鼠血清的获得 | 第56页 |
| ·酶联免疫吸附实验ELISA | 第56-57页 |
| ·蛋白免疫印迹实验Western Blotting | 第57-58页 |
| 三. 实验结果 | 第58-71页 |
| 1. P2Y_6基因对于巨噬细胞发育分化的影响 | 第58-62页 |
| ·P2Y_6受体表达量在巨噬细胞成熟过程中逐步增高 | 第58-59页 |
| ·在巨噬细胞成熟过程中UDP释放不断增加 | 第59-60页 |
| ·P2Y_6基因敲除小鼠中Ly6C~+细胞并无明显变化 | 第60-61页 |
| ·P2Y_6基因敲除小鼠脾脏中的成熟巨噬细胞比例并无显著变化 | 第61-62页 |
| 2. P2Y_6基因对于巨噬细胞极化的影响 | 第62-65页 |
| ·P2Y_6基因mRNA水平在M2(IL-4)刺激下上调 | 第62-63页 |
| ·P2Y_6KO小鼠骨髓来源巨噬细胞中M1表面标志物CD16/32表达显著上升 | 第63-64页 |
| ·在M1(IFN-γ)和M2(IL-4)刺激下,P2Y_6基因敲除对于巨噬细胞极化的影响 | 第64-65页 |
| 3. P2Y_6基因对于巨噬细胞细胞因子.趋化因子释放的影响 | 第65-71页 |
| ·UDP可显著激活巨噬细胞MCP-1等细胞因子的表达 | 第65-66页 |
| ·UDP可以通过P2Y_6受体上调MCP-1的表达 | 第66-68页 |
| ·P2Y_6敲除型小鼠移植瘤模型中MCP-1降低 | 第68-69页 |
| ·UDP可以通过P2Y_6受体激活ERK信号通路 | 第69-71页 |
| 四. 讨论与小结 | 第71-73页 |
| 第五章 结论与展望 | 第73-75页 |
| 一. 结论 | 第73页 |
| 二. 展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 附录Ⅰ 缩略词 | 第79-81页 |
| 附录Ⅱ 攻读硕士学位期间科研工作成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
