| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-15页 |
| ·香蕉枯萎病的分布及危害 | 第10页 |
| ·尖抱镰刀菌古巴专化型的进化与多样性 | 第10-11页 |
| ·香蕉枯萎病致病机理研究现状 | 第11-13页 |
| ·尖孢镰刀菌SIX基因国内外研究现状 | 第13-14页 |
| ·项目研究的目的意义 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-34页 |
| ·材料 | 第15-18页 |
| ·质粒和菌株 | 第15-16页 |
| ·试剂 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·主要培养基及试剂配方 | 第16-18页 |
| ·实验方法 | 第18-31页 |
| ·CTAB法提取基因组DNA | 第18-19页 |
| ·质粒的小量提取 | 第19页 |
| ·总RNA的提取 | 第19页 |
| ·反转录反应 | 第19-20页 |
| ·基因的PCR和RT-PCR扩增 | 第20页 |
| ·FoSIX2和FoSIX6基因敲除载体的构建 | 第20-25页 |
| ·尖孢镰刀菌原生质体转化 | 第25-26页 |
| ·转化子的鉴定 | 第26-27页 |
| ·突变体菌落的形态观察 | 第27页 |
| ·突变体表型的荧光显微观察 | 第27页 |
| ·突变体的产孢量测定 | 第27页 |
| ·液体培养基中突变体的菌丝干重测定 | 第27-28页 |
| ·突变体异核体的观察 | 第28页 |
| ·不同碳源条件下突变体生长速率及菌落形态观察 | 第28页 |
| ·不同氮源突变体生长速率及菌落形态观察 | 第28页 |
| ·不同温度突变体的生长及菌落形态 | 第28页 |
| ·不同pH突变体的生长及菌落形态 | 第28页 |
| ·渗透压胁迫对突变体生长的影响 | 第28-29页 |
| ·外源氧胁迫对突变体生长的影响 | 第29页 |
| ·锂离子胁迫对突变体生长的影响 | 第29页 |
| ·细胞壁选择性压力对突变体生长的影响 | 第29页 |
| ·玻璃纸穿透实验 | 第29页 |
| ·基因缺失突变体与芽孢和木霉拮抗试验 | 第29页 |
| ·基因缺失突变体对农药的抗药性试验 | 第29-30页 |
| ·苹果定殖能力测定 | 第30页 |
| ·香蕉离体叶片定殖能力测定 | 第30页 |
| ·粗毒素的假茎致病力测定 | 第30页 |
| ·突变体毒素提取液对巴西苗根的影响 | 第30页 |
| ·基因缺失突变体粗毒素高效液相色谱分析 | 第30-31页 |
| ·香蕉苗水培致病性试验 | 第31页 |
| ·盆栽香蕉苗致病力测定 | 第31页 |
| ·突变体基因功能回复验证 | 第31-34页 |
| ·互补引物的设计 | 第31-32页 |
| ·扩增基因互补片段 | 第32页 |
| ·互补片段的回收、连接、转化 | 第32页 |
| ·克隆载体的酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·载体kOV21和基因互补片段的双酶切、连接和转化 | 第33-34页 |
| ·基因互补载体的双酵切验证 | 第34页 |
| ·香蕉枯萎病菌互补载体转化和互补转化子的鉴定 | 第34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-62页 |
| ·目的基因的PCR和RT-PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·FoSIX2和FoSIX6基因敲除载体的构建 | 第35-39页 |
| ·同源臂的PCR扩增 | 第35页 |
| ·FoSIX2-A-T和FoSIX6-A-T重组质粒的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·FoSIX2-A-pCT74重组质粒的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·FoSIX2-A-pCT74-B重组质粒的酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·Foc4原生质体的制备 | 第38-39页 |
| ·转化子的PCR检测 | 第39-42页 |
| ·检测上游的同源重组的发生 | 第39页 |
| ·检测下游的同源重组的发生 | 第39-40页 |
| ·抗性基因整合到基因组的检测 | 第40-41页 |
| ·目的基因的检测 | 第41-42页 |
| ·突变体的表型观察 | 第42-45页 |
| ·突变体的培养形态观察 | 第42-43页 |
| ·突变体的孢子和菌丝显微形态观察 | 第43页 |
| ·野生型与突变体的绿色荧光的形态比较 | 第43-44页 |
| ·突变体孢子萌发的形态 | 第44-45页 |
| ·突变体的生物学特性分析 | 第45-59页 |
| ·突变体的产孢量测定 | 第45页 |
| ·突变体的菌丝干重测定 | 第45页 |
| ·突变体异核体的观察 | 第45-46页 |
| ·不同碳源突变体生长速率及菌落形态观察 | 第46-47页 |
| ·不同氮源突变体生长速率及菌落形态观察 | 第47-48页 |
| ·不同温度突变体△FoSIX2/6的生长及菌落形态 | 第48-49页 |
| ·不同pH突变体△FoSIX2/6的生长及菌落形态 | 第49页 |
| ·渗透压胁迫对突变体生长的影响 | 第49-50页 |
| ·外源氧胁迫对突变体生长的影响 | 第50页 |
| ·锂离子胁迫对突变体生长的影响 | 第50-51页 |
| ·细胞壁选择性压力对突变体生长的影响 | 第51-52页 |
| ·玻璃纸穿透实验 | 第52页 |
| ·基因缺失突变体与芽孢拮抗试验 | 第52-53页 |
| ·基因缺失突变体与木霉对峙试验 | 第53页 |
| ·基因缺失突变体对农药的抗药性试验 | 第53-54页 |
| ·突变体定殖能力测定 | 第54页 |
| ·香蕉离体叶片的致病性测定 | 第54-55页 |
| ·香蕉假茎的致病性试验 | 第55页 |
| ·粗毒素提取液对香蕉苗毒力测定试验 | 第55-56页 |
| ·基因缺失突变体粗毒素高效液相色谱分析 | 第56-57页 |
| ·香蕉苗水培致病性试验 | 第57页 |
| ·香蕉苗根部侵染试验 | 第57-58页 |
| ·盆栽香蕉苗致病力测定 | 第58-59页 |
| ·互补功能回复验证 | 第59-62页 |
| ·FoSIX2和FoSIX6基因互补片段的获得 | 第60页 |
| ·互补载体酶切验证 | 第60-61页 |
| ·互补突变体的鉴定 | 第61-62页 |
| ·互补突变体的生物学特性分析 | 第62页 |
| 4 讨论 | 第62-67页 |
| ·基因敲除载体的构建 | 第62页 |
| ·基因敲除与转化子的鉴定 | 第62-63页 |
| ·突变体的表型变化分析 | 第63页 |
| ·突变体的生物学特性分析 | 第63-65页 |
| ·基因缺失对生化农药敏感性的影响 | 第65页 |
| ·基因缺失对尖孢镰刀菌粗毒素的影响 | 第65页 |
| ·基因缺失对尖孢镰刀菌致病能力的影响 | 第65-66页 |
| ·基因功能回复验证 | 第66-67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 附件 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
