| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-21页 |
| ·溶藻弧菌的特性及致病性研究进展 | 第12-19页 |
| ·分类地位和形态 | 第12页 |
| ·生化特性 | 第12-13页 |
| ·生活特性 | 第13页 |
| ·致病性 | 第13-14页 |
| ·毒力因子及致病机理 | 第14-16页 |
| ·摄铁系统研究进展 | 第16-19页 |
| ·本研究的技术路线 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 溶藻弧菌摄铁系统相关基因的克隆和序列分析 | 第21-41页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·工具酶与试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·主要溶液和试剂的配制 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-27页 |
| ·溶藻弧菌总 DNA 的提取 | 第23页 |
| ·引物设计 | 第23-24页 |
| ·摄铁系统相关基因的克隆 | 第24-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-40页 |
| ·hutB 基因的克隆 | 第27-29页 |
| ·hutC 基因的克隆 | 第29-32页 |
| ·hutD 基因的克隆 | 第32-34页 |
| ·hutW 基因的克隆 | 第34-36页 |
| ·hutX 基因的克隆 | 第36-38页 |
| ·hutZ 基因的克隆 | 第38-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 3 不同铁环境条件下摄铁系统相关基因的表达差异研究 | 第41-48页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·实验菌株 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·实验仪器 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-44页 |
| ·不同铁环境条件的设定 | 第41-42页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第42页 |
| ·DNase I 消化和 cDNA 的制备 | 第42页 |
| ·引物设计 | 第42-43页 |
| ·qRT-PCR 分析 | 第43-44页 |
| ·qRT-PCR 数据统计与分析 | 第44页 |
| ·结果分析 | 第44-46页 |
| ·hutB、hutC、hutD 基因在不同铁环境条件下的表达分析 | 第44页 |
| ·exbB、exbD、tonB 基因在不同铁环境条件下的表达分析 | 第44-45页 |
| ·hutW、hutX、hutZ 基因在不同铁环境条件下的表达分析 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 4 摄铁系统相关基因 hutBD 和 hutWXZ 的原核表达 | 第48-65页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·载体和菌株 | 第48页 |
| ·实验仪器 | 第48页 |
| ·主要试剂和溶液 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-54页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第49-52页 |
| ·蛋白质的诱导表达 | 第52-53页 |
| ·蛋白质表达条件优化 | 第53页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第53-54页 |
| ·实验结果 | 第54-64页 |
| ·hutB 基因的原核表达 | 第54-56页 |
| ·hutD 基因的原核表达 | 第56-58页 |
| ·hutW 基因的原核表达 | 第58-60页 |
| ·hutX 基因的原核表达 | 第60-62页 |
| ·hutZ 基因的原核表达 | 第62-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| 5 摄铁系统相关基因表达重组蛋白的免疫原性分析 | 第65-70页 |
| ·实验材料 | 第65-66页 |
| ·菌株和质粒 | 第65页 |
| ·实验动物 | 第65页 |
| ·实验仪器和主要试剂 | 第65页 |
| ·主要试剂和溶液 | 第65-66页 |
| ·实验方法 | 第66-67页 |
| ·抗原准备及安全性评估 | 第66页 |
| ·免疫 | 第66页 |
| ·攻毒菌液准备 | 第66页 |
| ·采血与攻毒 | 第66-67页 |
| ·兔抗血清准备 | 第67页 |
| ·抗体效价的测定 | 第67页 |
| ·实验结果 | 第67-69页 |
| ·安全性评估 | 第67页 |
| ·抗体效价检测 | 第67-68页 |
| ·免疫保护率 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| 6 总结 | 第70-71页 |
| ·溶藻弧菌摄铁系统相关基因的克隆和序列分析 | 第70页 |
| ·摄铁系统相关基因在不同铁环境条件下表达差异研究 | 第70页 |
| ·摄铁系统相关基因 hutBD 和 hutWXZ 的原核表达 | 第70页 |
| ·溶藻弧菌摄铁系统相关基因表达重组蛋白的免疫原性分析 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 作者简介 | 第79-80页 |
| 导师简介 | 第80页 |
