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携带XAF1的复制型溶瘤腺病毒治疗恶性肿瘤的研究

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-11页
第一章 肿瘤的靶向基因-病毒治疗第11-34页
   ·肿瘤的基因治疗第11-17页
   ·肿瘤的溶瘤病毒治疗第17-23页
   ·肿瘤治疗新概念:基因-病毒治疗第23-26页
   ·XAF1:一个新发现的抑癌基因第26-29页
   ·不依赖于CASPASE 的程序性细胞死亡第29-34页
第二章 溶瘤腺病毒携带XAF1 基因通过不依赖于CASPASE 的凋亡特异性地杀伤肿瘤细胞第34-69页
 前言第34-36页
   ·实验材料与方法第36-47页
     ·菌株、细胞及试剂第36-37页
     ·质粒第37-40页
     ·同源重组法构建腺病毒ZD55-Gene第40-41页
     ·病毒的空斑纯化、大量制备与滴度测定第41-42页
     ·抽提病毒DNA(QIAamp DNA Blood Mini Kit)第42-43页
     ·病毒复制能力分析第43页
     ·免疫荧光第43页
     ·Annexin V 检测细胞凋亡第43页
     ·Western blot第43-44页
     ·细胞存活率和CPE(细胞病变效应)实验第44-45页
     ·流式细胞术检测亚二倍体峰第45页
     ·制备核抽提液第45页
     ·动物实验第45-46页
     ·原位凋亡检测第46-47页
     ·统计学处理第47页
   ·研究结果第47-69页
     ·重组腺病毒ZD55-XAF1 的构建和鉴定第47-51页
     ·ZD55-XAF1 可诱导强大的细胞毒效应第51-54页
     ·ZD55-XAF1 通过不依赖于caspase 的凋亡来杀伤肿瘤细胞第54-58页
     ·过表达XAF1 不能诱导XIAP 的入核第58-61页
     ·自噬不参与ZD55-XAF1诱导的细胞死亡第61-62页
     ·ZD55-XAF1 对荷瘤小鼠的肿瘤生长抑制第62-64页
     ·ZD55-XAF1 联合ZD55-TRAIL 的双基因-病毒治疗第64-69页
第三章 XAF1 抗癌机制的相关研究第69-85页
 前言第69-70页
   ·实验材料与方法第70-77页
     ·菌株第70-71页
     ·酵母双杂交系统和cDNA 文库第71页
     ·质粒、质粒构建和引物第71页
     ·溶液和培养基第71-73页
     ·酵母的转化第73页
     ·用酵母双杂交系统筛选人胸腺cDNA 文库第73-74页
     ·酵母转化子β-半乳糖苷酶的活力测定第74页
     ·酵母质粒的抽提第74页
     ·电穿孔大肠杆菌的制备第74-75页
     ·RT-PCR第75-76页
     ·293 细胞转染第76-77页
     ·免疫荧光第77页
     ·免疫共沉淀第77页
   ·实验结果第77-83页
     ·诱饵质粒pGBKT7-XAF1第77-78页
     ·以XAF1 蛋白为诱饵在人胸腺cDNA 文库中获得了阳性cDNA 克隆第78-81页
     ·PCNA 功能的初步研究第81-83页
   ·讨论第83-85页
参考文献第85-97页
致谢第97-99页
攻读学位期间发表的学术论文目录第99-100页

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