| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-19页 |
| 引言 | 第19-34页 |
| 第一节 心力衰竭时心源性猝死发生的研究背景及现况 | 第19-20页 |
| 第二节 动作电位在心力衰竭时变化的研究 | 第20-21页 |
| 第三节 复极储备与心力衰竭时心律失常的关系 | 第21-22页 |
| 第四节 延迟整流钾电流在复极储备中的作用 | 第22-24页 |
| 第五节 心衰模型的建立依据 | 第24-26页 |
| 第六节 细胞转染的基本原理及应用 | 第26页 |
| 第七节 RT-qPCR测定的基本原理及意义 | 第26-28页 |
| 第八节 Western Blot的基本原理及意义 | 第28-29页 |
| 第九节 膜片钳技术的基本原理及应用 | 第29-30页 |
| 第十节 研究目的及意义 | 第30-34页 |
| 第一部分 兔心衰模型中复极储备通道mRNA变化机制的研究 | 第34-83页 |
| 第一章 实验方案 | 第34-55页 |
| 第一节 实验流程 | 第34-35页 |
| 第二节 实验对象 | 第35页 |
| 第三节 实验仪器及材料 | 第35-37页 |
| ·建立心衰模型手术器材 | 第35页 |
| ·提取RNA及RT-qPCR检测器材 | 第35-36页 |
| ·兔心室肌细胞膜片钳检测相应设备 | 第36-37页 |
| 第四节 药品及试剂 | 第37-38页 |
| ·建立心衰模型所需药品及试剂 | 第37页 |
| ·提取RNA、RT-qPCR检测及膜片钳实验相关试剂 | 第37-38页 |
| 第五节 相关溶液配制 | 第38-41页 |
| 第六节 实验方法 | 第41-55页 |
| ·实验分组 | 第41-42页 |
| ·兔腹主动脉缩窄法建立心衰模型 | 第42-44页 |
| ·兔腹主动脉缩窄术的操作步骤 | 第42-44页 |
| ·兔心衰的评定标准 | 第44页 |
| ·兔心室肌细胞分离 | 第44-46页 |
| ·兔心室肌细胞总RNA制备及浓度测定 | 第46-47页 |
| ·兔心室肌细胞总RNA的提取 | 第46-47页 |
| ·RNA浓度测定与纯度判定 | 第47页 |
| ·RT-qPCR的具体操作步骤及结果运算方法 | 第47-50页 |
| ·逆转录的具体操作步骤 | 第47-48页 |
| ·定量PCR的具体操作步骤 | 第48-49页 |
| ·2~(-△△Ct)值的运算方法 | 第49-50页 |
| ·全细胞膜片钳记录电流方法 | 第50-52页 |
| ·兔单个心室肌细胞的预处理 | 第50页 |
| ·全细胞膜片钳记录方法 | 第50-51页 |
| ·诱发电流参数的设定及结果记录 | 第51-52页 |
| ·统计学处理 | 第52-55页 |
| 第二章 实验结果 | 第55-67页 |
| 第一节 兔腹主动脉缩窄心衰模型建立的评定结果 | 第55-58页 |
| ·兔腹主动脉缩窄心衰模型中一般情况的变化 | 第55-56页 |
| ·兔腹主动脉缩窄心衰模型中心脏超声指标的变化 | 第56-58页 |
| 第二节 心衰对兔心室肌细胞I_(Kr)和I_(Ks)通道mRNA表达的影响 | 第58-61页 |
| ·心衰对兔心室肌细胞KCNH2在mRNA水平表达的影响 | 第58-59页 |
| ·心衰对兔心室肌细胞KCNQ1在mRNA水平表达的影响 | 第59-61页 |
| 第三节 钾通道抑制剂对心衰兔心室肌细胞复极储备相关离子流的影响 | 第61-67页 |
| ·钾通道抑制剂对心衰兔心室肌细胞AP的影响 | 第61-63页 |
| ·I_(Kr)通道抑制剂Dof对心衰兔心室肌细胞复极储备相关离子流的影响 | 第63-67页 |
| 第三章 讨论 | 第67-80页 |
| 第一节 兔腹主动脉缩窄心衰模型建立的效果评价 | 第67-70页 |
| ·兔腹主动脉缩窄心衰模型中一般情况的变化 | 第67-68页 |
| ·兔腹主动脉缩窄心衰模型中心脏超声指标的变化 | 第68-70页 |
| 第二节 心衰对兔心室肌细胞I_(Kr)和I_(Ks)通道mRNA表达的影响 | 第70-73页 |
| ·心衰对兔心室肌细胞KCNH2在mRNA水平表达的影响 | 第70-72页 |
| ·心衰对兔心室肌细胞KCNQ1在mRNA水平表达的影响 | 第72-73页 |
| 第三节 钾通道抑制剂对心衰兔心室肌细胞复极储备相关离子流的影响 | 第73-77页 |
| ·钾通道抑制剂对心衰兔心室肌细胞AP的影响 | 第73-75页 |
| ·I_(Kr)通道抑制剂Dof对心衰兔心室肌细胞复极储备相关离子流的影响 | 第75-77页 |
| ·I_(Kr)通道抑制剂Dof对心衰兔心室肌细胞I_(Kr)电流的影响 | 第75-76页 |
| ·I_(Kr)通道抑制剂Dof对心衰兔心室肌细胞I_(Ks)电流的影响 | 第76-77页 |
| 第四节 小结 | 第77-80页 |
| 第四章 结论 | 第80-83页 |
| 第二部分 复极储备重要离子流I_(Ks)与I_(Kr)相互作用的研究 | 第83-137页 |
| 第一章 实验方案 | 第83-110页 |
| 第一节 实验流程 | 第83-84页 |
| 第二节 实验对象 | 第84页 |
| 第三节 实验仪器及材料 | 第84-86页 |
| ·HEK293细胞培养及转染部分仪器及材料 | 第84页 |
| ·RNA及蛋白提取及检测部分仪器及材料 | 第84-85页 |
| ·全细胞膜片钳检测部分相应设备 | 第85-86页 |
| 第四节 药品及试剂 | 第86-95页 |
| ·细胞培养及转染相关试剂 | 第86-94页 |
| ·RNA及蛋白提取及检测相关试剂 | 第94-95页 |
| ·全细胞膜片钳检测相关药物和试剂 | 第95页 |
| 第五节 相关溶液配制 | 第95-97页 |
| 第六节 实验方法 | 第97-110页 |
| ·实验分组 | 第97页 |
| ·HEK293细胞培养的操作步骤 | 第97-99页 |
| ·细胞复苏 | 第98页 |
| ·细胞冻存 | 第98-99页 |
| ·细胞传代 | 第99页 |
| ·HEK293细胞转染质粒的操作步骤 | 第99-101页 |
| ·细胞计数 | 第99-100页 |
| ·转染前细胞预处理 | 第100页 |
| ·细胞转染 | 第100-101页 |
| ·HEK293细胞RNA提取及RT-qPCR的具体步骤 | 第101-103页 |
| ·HEK293细胞总RNA的提取 | 第101-102页 |
| ·HEK293细胞总RNA浓度的测量及纯度的判定 | 第102-103页 |
| ·RT-qPCR的具体操作步骤及结果运算 | 第103页 |
| ·HEK293细胞蛋白提取及Western Blot的具体步骤 | 第103-107页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第103-104页 |
| ·细胞总蛋白含量的测定 | 第104-105页 |
| ·Western Blot的具体操作步骤 | 第105-107页 |
| ·HEK293细胞全细胞膜片钳检测KCNQ1电流的具体操作 | 第107页 |
| ·统计学处理 | 第107-110页 |
| 第二章 实验结果 | 第110-125页 |
| 第一节 KCNH2和KCNQ1质粒转染HEK293细胞后在mRNA水平的相互影响 | 第110-115页 |
| ·HEK293细胞共转染各功能型KCNH2对KCNQ1基因mRNA表达的影响 | 第110-111页 |
| ·HEK293细胞共转染KCNQ1对各功能型KCNH2基因mRNA表达的影响 | 第111-115页 |
| 第二节 KCNH2和KCNQ1质粒转染HEK293细胞后在蛋白水平的相互影响 | 第115-119页 |
| ·HEK293细胞共转染各功能型KCNH2对KCNQ1在蛋白水平表达的影响 | 第115-117页 |
| ·HEK293细胞共转染KCNQ1对各功能型KCNH2在蛋白水平表达的影响 | 第117-119页 |
| 第三节 HEK293细胞共转染各功能型KCNH2对KCNQ1电流的影响 | 第119-125页 |
| ·共转染功能野生型质粒WT-KCNH2对KCNQ1电流的影响 | 第119-121页 |
| ·共转染功能获得型质粒T618I-KCNH2对KCNQ1电流的影响 | 第121-122页 |
| ·共转染功能缺失型质粒V535M-KCNH2对KCNQ1电流的影响 | 第122-125页 |
| 第三章 讨论 | 第125-134页 |
| 第一节 KCNH2和KCNQ1质粒转染HEK293细胞后在mRNA水平的相互影响 | 第125-127页 |
| ·HEK293细胞共转染各功能型KCNH2对KCNQ1基因mRNA表达的影响 | 第125-126页 |
| ·HEK293细胞共转染KCNQ1对各功能型KCNH2基因mRNA表达的影响 | 第126-127页 |
| 第二节 KCNH2和KCNQ1质粒转染HEK293细胞后在蛋白水平的相互影响 | 第127-129页 |
| ·HEK293细胞共转染各功能型KCNH2对KCNQ1在蛋白水平表达的影响 | 第127-128页 |
| ·HEK293细胞共转染KCNQ1对各功能型KCNH2在蛋白水平表达的影响 | 第128-129页 |
| 第三节 HEK293细胞共转染各功能型KCNH2对KCNQ1电流的影响 | 第129-130页 |
| ·共转染功能野生型质粒WT-KCNH2对KCNQ1电流的影响 | 第129-130页 |
| ·共转染功能突变型质粒T618I-KCNH2或V535M-KCNH2对KCNQ1电流的影响 | 第130页 |
| 第四节 小结 | 第130-134页 |
| 第四章 结论 | 第134-137页 |
| 参考文献 | 第137-146页 |
| 致谢 | 第146-149页 |
| 附录 | 第149-166页 |
| 参考文献 | 第159-166页 |
| 个人简历 | 第166-167页 |
