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利用dsRNA体外饲喂和转基因水稻沉默褐飞虱相关基因的研究

中文摘要第1-8页
Abstract第8-10页
缩略词表第10-11页
1 前言第11-27页
   ·褐飞虱对水稻的危害第11-12页
   ·RNAi的定义及其发展史第12-16页
     ·RNAi的发展史第12-13页
     ·RNAi的作用机制第13-14页
     ·RNAi在昆虫中的定义第14-16页
   ·RNAi过程中的重要因子第16-18页
     ·siRNA与DICER第16-17页
     ·RISC第17-18页
   ·昆虫RNAi过程吸收机制的各组分第18-21页
     ·SID-1第18-20页
     ·清道夫受体第20页
     ·Vacuolar H~+ ATPase第20页
     ·RSD-3第20页
     ·依赖RNA的RNA多聚酶(RdRp)第20-21页
   ·半翅目中摄取dsRNA的方式及RNAi的应用第21-26页
     ·微滴注射第23-24页
     ·人工饲料喂养第24页
     ·转基因植物喂养第24-25页
     ·运用RNAi控制半翅目害虫第25-26页
   ·研究的目的和意义第26-27页
2 材料与方法第27-40页
   ·实验材料第27-28页
     ·水稻材料第27页
     ·供试昆虫第27页
     ·菌株、载体与候选基因第27-28页
   ·实验方法第28-40页
     ·体外转录形成dsRNA第28-29页
     ·dsRNA体外喂食褐飞虱第29-30页
     ·褐飞虱RNA的抽提及反转录第30-31页
     ·Real-time PCR相对表达量检测第31页
     ·干涉载体的构建第31-32页
     ·根癌农杆菌介导的水稻遗传转化第32页
     ·T_0代转基因植株阳性检测第32页
     ·T_0代转基因植株的拷贝数检测第32-34页
     ·T_0代转基因单拷贝植株的表达量检测第34页
     ·单拷贝转基因T_1代家系的纯合单株筛选第34页
     ·转基因苗喂食褐飞虱第34-35页
     ·转基因单拷贝植株的Northern blotting检测第35-40页
3 结果与分析第40-55页
   ·dsRNA的体外合成第40-42页
   ·体外喂食dsRNA后褐飞虱的死亡率统计第42-44页
   ·体外喂食dsRNA后褐飞虱体内相关目的基因的表达量分析第44-46页
   ·干涉载体的构建和遗传转化第46页
   ·T_0代转基因植株的阳性检测第46页
   ·T_0代转基因植株的拷贝数检测第46-50页
   ·T_0代转基因单拷贝植株的表达量检测第50页
   ·单拷贝转基因T_1代家系的纯合单株筛选第50-51页
   ·转基因幼苗喂食后褐飞虱体内相关目的基因的相对表达量检测第51-54页
   ·转基因单拷贝植株的Northern blotting检测第54-55页
4 讨论第55-58页
   ·关于dsRNA体外喂食褐飞虱第55-56页
   ·关于转基因植株介导褐飞虱RNAi第56-57页
   ·体外喂食实验中褐飞虱虫源的选择第57-58页
5 展望第58-59页
参考文献第59-68页
附录1 农杆菌介导的遗传转化培养基配方第68-72页
附录2 个人简历第72-73页
致谢第73页

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